高危型人乳头瘤病毒检测方法研究

发布时间：2017-08-09 13:35

  本文关键词：高危型人乳头瘤病毒检测方法研究

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【摘要】：人乳头瘤病毒(HPV)是一种DNA病毒,主要感染人的皮肤和粘膜,高危型人乳头瘤病毒的持续感染与宫颈癌的发生密切相关,因此建立一种快速简便的检测高危型HPV的方法具有十分重要的意义。本研究的主要内容如下：第一章,简要介绍了人乳头瘤病毒及其与宫颈癌的关系,总结了HPV的检测方法,详细阐述了一些核酸等温扩增方法及其应用,提出了本课题的研究思路及方法。第二章,建立了基于聚合酶链式反应和芯片电泳检测的高危型人乳头瘤病毒HPV16和HPV18的检测方法,分别使用了通用型引物和特异性引物对HPV DNA进行扩增以达到可以检测的含量,扩增产物的DNA测序结果证实了两种扩增的准确性。使用微芯片电泳系统检测PCR产物,实现了DNA样品的快速高通量分析,单个样品检测时间约为2-3分钟,最少样品消耗量约为2μL,灵敏度可以达到102个细胞。第三章,建立了基于环介导等温扩增(LAMP)的可视化高危型人乳头瘤病毒HPV16和HPV18的检测方法,产物可以使用可视化方法检测。与传统检测方法相比,所有反应物事先加好,整个反应过程中不需要打开盖子,结束后无需额外加入荧光染料,避免了可能造成的交叉污染,同时大大缩短了反应时间,提高了反应的准确性,有望用于辅助宫颈癌早期筛查,具有实际应用前景。
【关键词】：人乳头瘤病毒 聚合酶链式反应 芯片电泳 环介导等温扩增 可视化检测
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33;R730.43
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 绪论12-24
• 1.1 人乳头瘤病毒概述12-14
• 1.1.1 HPV及其亚型12
• 1.1.2 HPV结构12-13
• 1.1.3 HPV感染和宫颈癌的关系13-14
• 1.2 HPV检测方法14-16
• 1.3 核酸等温扩增技术16-22
• 1.3.1 核酸扩增技术发展概述16-17
• 1.3.2 核酸等温扩增技术及其应用17-22
• 1.4 本课题的提出及意义22-24
• 第二章 基于聚合酶链式反应和芯片电泳检测的高危型人乳头瘤病毒检测方法24-39
• 2.1 引言24-25
• 2.2 实验部分25-32
• 2.2.1 实验所需的仪器和试剂25-26
• 2.2.2 宫颈癌细胞培养26-27
• 2.2.3 宫颈癌细胞系基因组DNA提取及浓度检测27-28
• 2.2.4 HPV通用引物PCR扩增28-29
• 2.2.5 HPV特异性引物PCR扩增29-31
• 2.2.6 PCR产物检测31-32
• 2.3 结果与讨论32-38
• 2.3.1 HPV通用引物PCR扩增32-34
• 2.3.2 HPV特异性引物PCR扩增34-38
• 2.4 本章小结38-39
• 第三章 基于环介导等温扩增的可视化高危型人乳头瘤病毒检测方法39-52
• 3.1 引言39-41
• 3.2 实验部分41-43
• 3.2.1 实验所需的仪器和试剂41
• 3.2.2 HPV环介导等温扩增41-43
• 3.2.3 环介导等温扩增产物检测43
• 3.3 结果与讨论43-50
• 3.3.1 HPV环介导等温扩增43-45
• 3.3.2 临床样品检测45-50
• 3.4 本章小结50-52
• 第四章 结论52-53
• 参考文献53-59
• 致谢59-60
• 研究成果及发表的学术论文60-61
• 作者及导师简介61-62
• 附件62-63

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本文编号：645565