食管鳞癌放射抗拒细胞株蛋白指纹图谱特征的实验研究

发布时间：2017-08-09 15:37

  本文关键词：食管鳞癌放射抗拒细胞株蛋白指纹图谱特征的实验研究

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【摘要】：目的:探讨食管鳞状细胞癌(ECa109)放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱,为进一步开展临床研究提供依据。方法:1.确定食管鳞状细胞癌细胞株ECa109的亚致死剂量射线。2.构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株模型。食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR是用亚致死剂量放射线反复照射法获得的,ECa109-IR来源于食管鳞癌细胞株ECa109,是ECa109接受5次亚致死剂量射线后存活的第五代亚克隆细胞。3.检测食管鳞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR的放射敏感性。克隆生存试验、细胞增殖试验和流式细胞术比较ECa109-IR和ECa109的放射敏感性。4.测差异蛋白谱——用蛋白指纹图谱技术检测放射抗拒细胞株ECa109-IR与放射敏感细胞株ECa109之间差异的蛋白谱。结果:1、建立食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR。ECa109-IR为ECa109接受亚致死剂量射线反复5次照射后,存活的第五代亚克隆细胞株为放射抗拒细胞株ECa109-IR。2、ECa109-IR细胞的放射抗拒性分析。a.克隆生存实验结果显示ECa109-IR的存活克隆比ECa109的更大、数量更多,表现为放射抗拒。ECa109-IR的剂量存活曲线下降趋势比ECa109慢。从而证实ECa109-IR的放射抗拒性明显高于ECa109,ECa109-IR的放射抗拒性强。b.细胞增值实验射线对放射抗拒细胞株ECa109-IR的生长影响效应较小,射线照射后细胞恢复时间短、增长快。c.流式细胞术G0/G1的百分率:ECa109-IR和ECa109无明显差异,S期的百分率:ECa109-IR比ECa109高,G2/M期的百分率:ECa109-IR比ECa109低,表明ECa109-IR细胞放射诱导的G1/S和G2/M期阻滞的作用在明显弱于ECa109,这与典型的放射抗拒表型一致。该实验表明,放射诱导的细胞周期调节在放射抗拒细胞株ECa109-IR发生了改变。3.ECa109-IR和ECa109蛋白指纹图谱:ECa109-IR细胞和ECa109细胞的蛋白质荷比峰存在明显差异(P0.05的差异峰为21个,P0.01的差异峰为19个),差异峰的M/Z几乎均在6000以内,其中以M/Z在2000-6000最多见。以上显示ECa109-IR细胞和ECa109细胞蛋白图谱存在差异,即两者之间存在差异蛋白,这些蛋白极有可能为决定ECa109-IR和ECa109放射敏感性差异的原因。结论:放射抗拒ECa109-IR细胞和放射敏感ECa109细胞之间存在差异蛋白质荷比峰,也是ECa109-IR放射抗拒的原因,并为临床研究提供依据。
【关键词】：食管鳞癌 放射治疗 放疗抵抗 蛋白指纹图谱技术
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-11
• 实验材料11-13
• 实验方法13-15
• 1.ECa109细胞株的复苏13
• 2.细胞培养传代13-14
• 3.细胞的冻存14
• 4.活细胞计数14
• 5.蛋白质的提取14-15
• 实验步骤15-17
• 1.培养ECa109细胞15
• 2.建立ECa109-IR细胞株15
• 3、克隆生存实验探讨ECa109-IR的放射抗拒性15-16
• 4、细胞增值实验分析ECa109-IR细胞的放射抗拒性16
• 5、流式细胞术检测ECa109-IR的放射抗拒性16-17
• 6、ECa109-IR细胞和ECa109细胞蛋白指纹图谱测定17
• 结果17-23
• 1.放射抗拒ECa109细胞株的建立17
• 2.ECa109-IR细胞的放射抗拒性分析17-20
• 3.ECa109-IR细胞蛋白指纹图谱20-23
• 讨论23-25
• 小结25
• 参考文献25-29
• 致谢29-30
• 附录A 个人简历及发表文章30-40
• 附录B 综述40-52
• 参考文献48-52

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本文编号：646055