二甲双胍联合顺铂对鼻咽癌细胞增殖、侵袭迁移的影响

发布时间：2017-08-12 08:14

  本文关键词：二甲双胍联合顺铂对鼻咽癌细胞增殖、侵袭迁移的影响

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【摘要】：目的鼻咽癌是头颈部常见的恶性肿瘤,在我国南方发病率较高,由于发病位置隐蔽,临床症状不明显,诊断较困难,预后较差。通过检测二甲双胍(Metformin)联合顺铂(Cisplatin,DDP)对人鼻咽癌低分化细胞株CNE-2增殖和侵袭迁移能力的影响,初步研究二甲双胍对鼻咽癌细胞凋亡及侵袭抑制的作用机制,探讨二甲双胍作为潜在性抗肿瘤药物的可行性。方法:1.体外培养鼻咽癌CNE-2细胞,Met组给与不同药物浓度(0、1、5、10、20、40mmol/L),DDP组(0、0.5、1、2、4、8mg/L),分别处理细胞24h、48h、72h,MMT法检测细胞增殖情况。根据之前细胞增殖情况,分别选择最佳药物浓度,DDP(2mg/L)、Met(20mmol/L)、联合组(Met 20mmol/L+DDP 2 mg/L),继续培养,MTT法观察细胞24h、48h、72h增殖情况。2.Boyden Chamber实验检测不同处理组Met(20mmol/L)、DDP(2mg/L)、Met(20mmol/L)+DDP(2mg/L)的CNE-2细胞侵袭情况以及两者联合应用处理细胞观察细胞侵袭能力差异。3.划痕实验观察Met(20mmol/L)、DDP(2mg/L)及两者联合处理CNE-2细胞24h后细胞迁移情况以及两者联合应用处理细胞观察细胞迁移能力差异。4.Met(20mmol/L、40mmol/L)处理CNE-2细胞24h,流式细胞技术观察细胞凋亡情况。5.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Met(20mmol/L、40mmol/L)处理CNE-2细胞48h后GAPDH(内参)、caspase-3、cleaved-PARP、Vim、MMP-9的表达情况的变化。结果:1.MTT结果显示:不同浓度Met和DDP对鼻咽癌细胞CNE-2均具有显著的增殖抑制作用,二者联合使用抑制作用明显增加。2.侵袭实验结果显示:不同浓度Met和DDP对鼻咽癌细胞CNE-2均有侵袭迁移抑制作用,联合用药迁移抑制率较单用DDP更加显著。3.划痕实验结果显示:不同浓度Met和DDP对鼻咽癌细胞CNE-2均有迁移抑制作用,联合用药迁移抑制率较单用DDP更加显著。4.流式细胞仪检测细胞凋亡,二甲双胍20mmol/L、40mmol/L处理CNE-2细胞后细胞凋亡率达到7.03%、12.49%,较对照组(2.02%)存在显著差异(p0.05)。5.蛋白印迹试验结果显示:caspase-3、MM-9、Vim表达下降,E-cadherin、cleaved-PARP表达升高。结论:1.二甲双胍能增强顺铂对鼻咽癌细胞杀伤作用。2.二甲双胍能抑制CNE-2细胞的增殖、侵袭、迁移。3.二甲双胍能诱导细胞凋亡。凋亡可能与关键凋亡蛋白caspase-3激活,酶解PARP(poly ADP-ribose polymerase)影响细胞稳定性,促进凋亡。4.二甲双胍抑制侵袭迁移与上皮细胞-间充质转化(Tepithelial-mesenchymal transition EMT)过程抑制有关,其相关过程的重要蛋白表达明显改变。
【关键词】：鼻咽癌 二甲双胍 凋亡
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 材料和方法13-19
• 1 材料与仪器13-14
• 2 实验方法14-18
• 3 统计学方法18-19
• 结果19-26
• 1.1 二甲双胍联合顺铂对鼻咽癌CNE-2 的增殖抑制作用19
• 1.2 二甲双胍、顺铂及两者联合处理CNE-2 细胞后细胞侵袭能力差异19
• 1.3 划痕迁移实验19
• 1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡实验19-20
• 1.5 蛋白印迹结果20-26
• 讨论26-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 附录38-46
• 附录A 中英文对照38-39
• 附录B 致谢39-40
• 附录C 已发表论文等40-41
• 附录D 综述41-46
• 参考文献44-46

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本文编号：660593