染氡BEAS-2B细胞组蛋白乙酰化对P53和MGMT基因的影响

发布时间：2017-08-12 09:08

  本文关键词：染氡BEAS-2B细胞组蛋白乙酰化对P53和MGMT基因的影响

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【摘要】：目的:人永生化支气管上皮细胞(BEAS-2B)暴露于放射性氡,观察BEAS-2B细胞暴露后组蛋白H3乙酰化改变情况及对P53和MGMT基因的影响,探究氡致肺癌早期细胞内相关分子生物学改变情况。方法:BEAS-2B细胞用LHC-8无血清培养基于37℃,5%CO2培养箱培养。设立对照组(C)和染氡组(Rn)。将处于对数生长期的细胞制备单细胞悬液,以每孔1×105个细胞的数量接种于Transwell膜上,第2天细胞贴壁后置于细胞气体染毒装置中,Transwell膜上方氡持续泵入直接对细胞染氡,膜下方通入培养基保持细胞湿润。氡浓度为20000bq/m3,染氡时间为30min,细胞染氡两次记作染氡1代(Rn1)。每代染氡结束后收集细胞,一部分继续下一次染氡,其余常规培养传代,传至第n代记作Rn1-n,共染氡10代,传代40代。对照组暴露于氡本底值浓度下该装置中,其余条件同染氡组。流式细胞仪检测细胞的细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位,软琼脂克隆形成实验分析细胞恶性转化程度,染色质免疫共沉淀试验检测P53基因和MGMT基因启动子区乙酰化组蛋白H3水平,染色质免疫共沉淀联合RT-PCR检测P53基因和MGMT基因m RNA表达情况,Western blot检测各组细胞P53和MGMT蛋白表达情况。结果:(1)染氡后细胞G1期缩短,S期延长,染氡细胞传代后晚期代数细胞凋亡率相比早期代数细胞降低,线粒体膜电位降低,细胞软琼脂克隆形成实验结果显示,BEAS-2B细胞在软琼脂中有较小的克隆形成率,但随着细胞染毒代数的增加以及传代,软琼脂克隆形成率逐渐增高,染毒10代克隆形成率最高。(2)染氡细胞P53基因组蛋白H3乙酰化水平较对照组降低,MGMT基因组蛋白H3乙酰化水平较对照组增加。(3)组蛋白H3乙酰化修饰发生后P53基因表达和蛋白表达较对照组减少,MGMT基因和蛋白表达较对照组增加。结论:1.染氡后细胞出现恶性转化趋势。2、染氡后细胞P53基因组蛋白H3乙酰化水平降低,MGMT基因组蛋白H3乙酰化水平升高。3、组蛋白H3乙酰化水平改变后,P53基因和蛋白表达水平降低,MGMT基因表达水平和蛋白表达水平升高。
【关键词】：氡 BEAS-2B细胞 组蛋白H3乙酰化 P53 MGMT
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-12
• 第一部分 氡致BEAS-2B细胞早期恶性转化12-21
• 1．材料与方法12-15
• 1.1 试剂和仪器12-13
• 1.1.1 试剂12
• 1.1.2 仪器12-13
• 1.1.3 细胞13
• 1.2 方法13-15
• 1.2.1 细胞培养与照射13-14
• 1.2.2 细胞周期分析14
• 1.2.3 细胞凋亡分析14
• 1.2.4 线粒体膜电位测定14
• 1.2.5 软琼脂克隆检测染氡细胞和对照组细胞恶性转化趋势14-15
• 1.2.6 统计分析15
• 2 结果15-19
• 2.1 细胞形态变化15-16
• 2.2 细胞周期变化16
• 2.3 细胞凋亡率变化16-17
• 2.4 线粒体膜电位改变17-18
• 2.5 软琼脂克隆结果18-19
• 3.讨论19-21
• 第二部分 染氡后BEAS-2B细胞P53和MGMT基因启动子区域组蛋白H3乙酰化表达水平的研究21-30
• 1 材料与方法21-26
• 1.1 材料21-22
• 1.1.1 主要试剂21-22
• 1.1.2 主要仪器22
• 1.2 方法22-26
• 1.2.1 染色质免疫共沉淀22-26
• 1.2.2 琼脂糖凝胶电泳实验26
• 2 结果26-28
• 2.1 超声条件探索26-27
• 2.2 RT-QPCR检测P53基因和MGMT基因启动子区组蛋白H3乙酰化水平27-28
• 3 讨论28-30
• 第三部分 染氡后BEAS-2B细胞P53和MGMT基因组蛋白H3乙酰化水平改变对基因表达的影响30-37
• 1 材料与方法30-33
• 1.1 材料30-31
• 1.1.1 主要试剂30
• 1.1.2 主要仪器30-31
• 1.2.方法31-33
• 1.2.1 Western blot实验检测P53和MGMT蛋白的表达情况31-33
• 1.2.2 RT-PCR检测P53和MGMT基因表达量33
• 2.结果33-35
• 2.1 P53和MGMT基因表达量结果33-34
• 2.2 P53基因和MGMT基因蛋白表达量34-35
• 3 讨论35-37
• 结论37-38
• 参考文献38-43
• 综述43-48
• 参考文献46-48
• 研究生期间科研经历及发表的文章48-49
• 中英文缩略语对照表49-50
• 致谢50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 府伟灵,黄庆;肿瘤表观遗传学[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);2004年04期

2 孙树汉;;肿瘤的表观遗传学研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期

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本文编号：660791