HER-2阳性乳腺癌转移的病理特征及黑米花青素的干预作用

发布时间：2017-08-12 19:21

  本文关键词：HER-2阳性乳腺癌转移的病理特征及黑米花青素的干预作用

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【摘要】：目的乳腺癌是女性最常见及发病率最高的女性恶性肿瘤,而HER-2阳性乳腺癌比例占乳腺癌的30%左右。细胞存活通路和死亡通路的调节对于恶性肿瘤的形成和发展中起非常重要的作用,RAS/RAF/MAPK信号通路是促肿瘤生长和转移的最重要通路。研究显示,膳食黑米花青素(Black Rice Anthocyanins,BRACs)能有效防治乳腺癌,但机制不明。本研究探讨HER-2阳性乳腺癌转移的病理特征及BRACs在体外抗HER-2阳性乳腺癌细胞转移机制。方法以HER-2阳性乳腺癌细胞MDA-MB-453为研究对象,以BRACs、RAS/RAF/MAPK通路化学抑制剂(ZM336372、U0126、SP600125)、及si RNA(RAF-si RNA、MEK-si RNA、JNK-si RNA)干扰RAF/MAPK通路,使用相差显微镜观察细胞形态;采用划痕愈合实验、Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞计数检测细胞活性;免疫印迹法检测RAS/RAF/MAPK信号通路中蛋白表达及蛋白磷酸化水平,免疫沉淀检测RAF/MAPK信号分子与HER-2蛋白的相互作用,PCR法检测raf、mek及jnk m RNA在MDA-MB-453细胞中的表达水平。结果1.相差显微镜观察到HER-2阳性乳腺癌细胞MDA-MB-453呈上皮样,多角形贴壁生长,与永生性正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,具有较强的迁移及侵袭能力(P0.05)。2.分别用BRACs、RAF/MAPK细胞通路抑制剂及si RNA沉默RAF/MAPK信号通路处理MDA-MB-453细胞,均能抑制MDA-MB-453细胞的迁移及侵袭(P0.05),当BRACs分别与RAF/MAPK信号通路抑制剂或RAF/MAPK通路Si RNN联合作用MDA-MB-453细胞,较BRACs单独处理细胞更能降低乳腺癌细胞迁移及侵袭能力(P0.05)。3.BRACs能降低MDA-MB-453细胞中RAF、MEK、ERK、JNK蛋白磷酸化水平及K-RAS、MMP-2/MMP-9蛋白的分泌,减少HER-2蛋白与RAF/MAPK通路蛋白之间的相互作用,也同时降低MMP-2/MMP-9与上游蛋白HER-2、ERK、JNK之间相互作用;当BRACs分别与RAF,MEK,JNK蛋白抑制剂或si RNA沉默RAF/MAPK信号通路联合处理MDA-MB-453细胞,较BRACs单独处理更能降低RAF、MEK、ERK、JNK蛋白磷酸化水平。4.BRACs能降低MDA-MB-453细胞中raf、mek和jnk m RNA表达(P0.05),当BRACs处理转染si RNA后MDA-MB-453细胞,与BRACs单独处理相比,发现其更抑制raf、mek和jnk m RNA表达水平(P0.05)。结论1.HER-2阳性乳腺癌细胞呈上皮样生长,生长快,容易转移。2.RAS/RAF/MAPK信号通路激活与HER-2阳性乳腺癌转移有关,而此通路在BRACs在抗HER-2阳性乳腺癌转移中发挥重要作用。3.RAS/RAF/MAPK通路抑制剂及si RNA均能联合BRACs的抑制作用。4.BRACs可作为以RAS/RAF/MAPK信号通路为靶点的天然抗HER-2阳性乳腺癌化疗辅助药物。
【关键词】：黑米花青素 HER-2受体 RAS/RAF/MAPK 乳腺癌 转移 MMP-9 体外实验
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-23
• 1 实验材料与方法23-28
• 1.1 实验材料23-24
• 1.2 实验方法24-28
• 2 实验结果28-50
• 2.1 HER-2 阳性乳腺癌28-30
• 2.2 BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌细胞转移30-38
• 2.3 BRACs联合RAF/MAPK抑制剂HER-2 阳性乳腺癌细胞转移38-43
• 2.4 BRACs联合RAF/MAPK siRNA抗HER-2 阳性乳腺细胞转移43-50
• 3 讨论50-55
• 3.1 HER-2 阳性乳腺癌病理学特征50
• 3.2 BRACs抑制HER-2 阳性乳腺癌转移作用50-51
• 3.3 K-RAS在BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌转移中作用51
• 3.4 RAF在BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌转移中的作用51-52
• 3.5 MEK在BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌转移中的作用52-53
• 3.6 JNK在BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌转移中的作用53-54
• 3.7 MMP-2/MMP-9 在BRACs抗HER-2 阳性乳腺癌转移中的作用54-55
• 4 结论55-56
• 参考文献56-66
• 文献综述66-74
• 参考文献71-74
• 附录74-75
• 攻读学位期间研究成果75-76
• 致谢76

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本文编号：663223