AMPK对胃上皮间充质转化及胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

发布时间：2017-08-15 13:11

  本文关键词：AMPK对胃上皮间充质转化及胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

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【摘要】：背景和目的:癌症细胞的侵袭和转移是肿瘤向恶性方向变化的重要标志。大部分癌症患者死亡并非死于原发性癌而是转移性癌。因此,本课题利用胃癌细胞模型,深入探讨癌症的侵袭和转移机制,对胃癌的治疗和预后具有重要的意义。上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育过程中的基本现象。它不仅参与胚胎形成与发育,同时在肿瘤侵袭转移过程中起着至关重要的作用,TGF-β信号是EMT的主要诱导因子之一。AMPK(单磷酸腺苷活化激酶,AMP-activited Protein Kinase)是细胞内能量感受器,调控生物体内能量平衡。目前关于AMPK对TGF-β诱导的EMT及肿瘤侵袭迁移调节的的系统性研究尚未见报道。因此,本课题旨在研究AMPK对TGF-β诱导的上皮间充质转化(EMT)及细胞侵袭迁移的调节作用。研究方法:1.胃癌组织中AMPK活性与EMT相关指标的表达:以免疫组化技术对不同临床分期的胃癌标本中的AMPK活性与EMT指标的表达进行相关性分析。同时从医院组织标本库冷冻保存(-86℃)的标本中,选取16例标本,以免疫印迹技术检测AMPK活性和EMT指标,分析两者的相关性。2.胃来源细胞株中AMPK活性与EMT相关指标的表达:以免疫印迹技术在胃来源细胞株中检测AMPK活性和EMT指标的表达。以划痕实验检测细胞的迁移能力。3.TGF-β诱导EMT的发生:以免疫印迹技术检测在TGF-β作用SGC-7901和MKN-28细胞不同时间后EMT相关蛋白的表达,以划痕实验来观察细胞形态变化和细胞迁移能力。4.AMPK抑制TGF-β诱导的EMT:以免疫印迹技术检测二甲双胍在作用细胞不同时间后AMPK磷酸化蛋白表达。以免疫印迹技术检测二甲双胍与TGF-β联合作用细胞后EMT相关蛋白表达,以进一步证明AMPK的激活是否能抑制EMT的发生。以划痕实验、Transwell实验检测细胞的侵袭迁移能力来观察AMPK对细胞生物行为学的影响。结果:1.胃癌组织中AMPK活性与EMT相关指标的表达:在不同临床分期的胃癌标本中p-AMPK,E-cadherin随着分期的上升而表达下降,P-smad2,Vimentin,N-cadherind随着分期的上升而表达增加。其中p-AMPK与P-smad2,Vimentin,N-cadherin的表达负相关,与E-cadherin的表达正相关。在16例标本中P-smad2,Vimentin,N-cadherin的表达均高于癌旁组织,而p-AMPK,E-cadherin的表达却在癌旁组织中高于胃癌组织。提示在胃黏膜癌变过程中p-AMPK对EMT起调节作用。2.胃来源细胞株中AMPK活性与EMT相关指标的表达:胃癌细胞株(MKN28,SGC-7901,823)中Vimentin,N-cadherin表达均低,可以筛选为诱导EMT的细胞。3.TGF-β诱导EMT的发生:随着TGF-β作用时间延长,细胞逐渐形成梭形,间充质化表型逐渐显现;SGC-7901和MKN-28细胞中间充质特性蛋白Vimentin,N-cadherin,β-catenin表达逐渐增强,上皮特性蛋白E-cadheirn表达降低。4.AMPK抑制TGF-β诱导的EMT:p-AMPK,p-ACC的表达随metformin处理时间的延长而逐渐增加;Metformin与TGF-β联合处理细胞后,EMT间充质性蛋白表达较TGF-β组明显降低;划痕实验中TGF-β诱导后细胞迁移距离较长,而metformin+TGF-β联合处理后,细胞迁移距离明显减短。Transwell实验中TGF-β诱导之后侵袭细胞数增多,而metformin+TGF-β联合处理后,侵袭的细胞数明显降低;结论:1.胃癌临床标本中的AMPK活性下降伴有EMT指标的上升,并且与胃癌转移程度密切相关;提示EMT指标的上升与AMPK活性有关;2.AMPK被活化后,EMT表型将显著下降,细胞实验证明了AMPK能抑制细胞的侵袭和转移;
【关键词】：TGF-β metformin AMPK 上皮间充质转化(EMT) 侵袭转移 胃癌
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词对照表10-12
• 第1章 引言12-16
• 第2章 材料与方法16-33
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 实验材料16
• 2.1.2. 主要试剂16-19
• 2.1.3 主要仪器19
• 2.1.4 日常消耗物品19-20
• 2.1.5 药品20
• 2.2 方法20-32
• 2.2.1 主要溶液的配置20-24
• 2.2.2 实验方法24-32
• 2.3 统计学处理32-33
• 2.3.1 免疫组化结果分析32
• 2.3.2 统计学分析32
• 2.3.3 伦理32-33
• 第3章 胃癌组织中AMPK活性和EMT相关指标的表达33-38
• 3.1 实验目的33
• 3.2 实验结果33-38
• 3.2.1. 病理资料整理33-34
• 3.2.2. 在胃癌不同分期中的各指标的表达34-35
• 3.2.3. 在胃癌中AMPK活性与EMT相关指标的关系35-36
• 3.2.4. 人胃癌和癌旁组织中AMPK，EMT相关指标的表达36-38
• 第4章 胃来源细胞株中p-AMPK和EMT相关指标的表达以及细胞迁移能力的检测38-41
• 4.1 实验目的38
• 4.2 实验结果38-41
• 4.2.1. 胃细胞中p-AMPK和EMT指标的表达38-40
• 4.2.2. 胃来源细胞的迁移能力40-41
• 第5章 TGF-β诱导胃癌细胞中上皮间充质转化的发生41-46
• 5.1 实验目的41-42
• 5.2 实验结果42-46
• 5.2.1. TGF-β诱导EMT间充质特性蛋白表达呈时间依赖性42-45
• 5.2.2. TGF-β诱导成EMT后对细胞的迁移能力的影响45-46
• 第6章 AMPK抑制胃癌细胞中EMT的发生46-51
• 6.1 实验目的46
• 6.2 实验结果46-51
• 6.2.1. metformin激活AMPK呈时间依赖性46-47
• 6.2.2. AMPK激活剂metformin抑制上EMT的发生47-49
• 6.2.3. AMPK抑制胃癌细胞的迁移49
• 6.2.4. AMPK抑制胃癌细胞的侵袭49-51
• 第7章 讨论51-55
• 7.1 临床标本中AMPK和EMT的关系51-52
• 7.2 胃来源细胞株p-AMPK和EMT相关指标检测以及细胞迁移能力的检测52
• 7.3 TGF-β对EMT的诱导作用52-53
• 7.4 AMPK抑制胃癌细胞的EMT53-55
• 第8章 结论与展望55-56
• 8.1 结论55
• 8.2 展望55-56
• 致谢56-57
• 参考文献57-60
• 附录60-66
• 攻读学位期间的研究成果66-67
• 综述 AMPK异常表达与在胃癌发生发展关系的研究进展67-76
• 参考文献 (References)72-76

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本文编号：678342