EYA2基因的CpG岛甲基化对肺腺癌发生发展的影响

发布时间：2017-08-18 07:43

  本文关键词：EYA2基因的CpG岛甲基化对肺腺癌发生发展的影响

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【摘要】：本论文旨在研究EYA2基因在肺腺癌中的甲基化水平和该基因表达量在肺腺癌细胞生长中的作用。首先,通过Western blotting方法检测了各种非小细胞肺癌细胞中EYA2蛋白的表达量,并使用荧光定量PCR方法检测EYA2基因的mRNA转录水平,结果显示蛋白水平和]mRNA转录水平在肺腺癌细胞中明显上调。其次,采用亚硫酸盐修饰测序法检测EYA2基因全CpG岛的甲基化水平,发现EYA2基因在肺腺癌细胞和肺腺癌组织中处于低甲基化水平,而在对照正常肺部细胞中处于高甲基化水平,且EYA2基因的甲基化程度和其蛋白表达量呈反向趋势。第三,利用RNA干扰方法在肺腺癌细胞中将其蛋白表达量稳定下调,检测EYA2基因表达水平对一些肺腺癌细胞生长相关指标的影响,具体方法如下：1.采用MTS法检测EYA2基因表达下调处理细胞的增殖情况；2.染色处理后,在流式细胞仪上检测该蛋白下调处理细胞的周期变化和凋亡变化；3.使用划痕模拟伤口愈合模型和trans-well模型的方法分别检测这些经过下调处理细胞的迁移和侵袭能力变化。结果发现EYA2基因表达下调导致肺腺癌细胞增殖速率明显低降低,处于G0/G1期的细胞数量明显上升,S期和G2/M期的细胞数量下降,细胞凋亡数量明显变多,细胞迁移和侵袭能力的明显减弱。由此得出,EYA2基因甲基化水平的降低以及其表达量升高在一定程度上对肺腺癌的发生与生长起着重要作用。
【关键词】：EYA2 非小细胞肺癌 甲基化 细胞生长 肿瘤扩散
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-13
• 1. 肺癌7-8
• 2. DNA甲基化8-11
• 3. EYA2基因研究立项依据11-13
• 第二章 实验材料与方法13-31
• 1. 实验材料13-19
• 1.1 仪器13-14
• 1.2 耗材14-15
• 1.3 试剂15-16
• 1.4 配制溶液16-19
• 2. 试验方法19-31
• 2.1 细胞复苏19
• 2.2 细胞培养19-20
• 2.3 细胞冻存20
• 2.4 组织样本采集20
• 2.5 靶蛋白表达检测20-22
• 2.6 mRNA转录水平检测22-23
• 2.7 甲基化检测23-27
• 2.8 靶基因表达抑制处理27-28
• 2.9 细胞增殖检测28-29
• 2.10 细胞周期和凋亡检测29
• 2.11 细胞的迁移29-30
• 2.12 侵袭能力检测30
• 2.13 数据分析30-31
• 第三章 结果31-41
• 1. EYA2在肺腺癌细胞中表达上调31-33
• 2. EYA2基因的CG岛在肺腺癌中表现为异常低甲基化水平33-34
• 3. 肺腺癌细胞中EYA2蛋白表达的下调抑制了细胞增殖,阻滞了细胞周期并增加了细胞的凋亡34-39
• 4. 肺腺癌细胞中EYA2蛋白的下调抑制了细胞的迁移和侵袭能力39-41
• 第四章 讨论41-49
• 1. EYA2基因的CPG岛分布以及该基因在肺腺癌中的甲基化异常变化41-43
• 2. EYA2基因与肺腺癌细胞生长和扩散相关生理功能的关系43-45
• 3. EYA2基因作为潜在肺腺癌特异性肿瘤标记物和治疗特异性靶标的重要性45-49
• 结论49-50
• 参考文献50-54
• 参与的科研项目54-55
• 致谢55

【共引文献】

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本文编号：693426