TET2对慢性髓细胞白血病细胞生长的影响

发布时间：2017-08-19 10:41

  本文关键词：TET2对慢性髓细胞白血病细胞生长的影响

  更多相关文章： TET2 慢性髓细胞白血病 CD34~+ K562 伊马替尼

【摘要】：目的:研究TET2对慢性髓细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)细胞生长的影响。方法:(1)使用密度梯度离心法分离CML患者和健康供体的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs),采用基因组PCR扩增直接测序方法(PCR amplification and directly sequencing)扩增TET2基因第3-11号外显子,将PCR产物进行Sanger测序。检测慢性髓细胞白血病慢性期(chronic phase,CP)和急变期(blastic crisis,BC)患者TET2基因突变情况。(2)使用CD34+细胞免疫磁珠富集试剂盒分离纯化骨髓CD34+细胞,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测CML-CP患者及健康供体BMMNCs及CD34+细胞中TET2的mRNA表达水平;(3)利用磷酸钙沉淀法制备慢病毒,以慢病毒为载体携带针对TET2的RNAi转导至K562细胞中,采用qRT-PCR,Western blot,Dot blot方法验证TET2的打靶效率;(4)采用细胞生长计数、集落生成实验,比较TET2沉默K562细胞和对照细胞的增殖、集落生成能力的差异;(5)使用不同浓度伊马替尼(Imatinib mesylate,IM)处理TET2沉默K562细胞和对照细胞,研究TET2沉默是否影响K562细胞对IM的敏感性。结果:1.所检测的20例CML-CP及26例CML-BC患者,其基因组DNA均未检测到TET2编码区外显子突变。2.TET2基因的mRNA表达在CML-CP患者BMMNCs及CD34+细胞中均较健康供体来源细胞显著降低(P0.05)。3.使用慢病毒递送含shNC(包含一段无义的对照shRNA核苷酸系列)(对照组)、shT1(实验组1)和shT2(实验组2)(均包含特异性沉默TET2的shRNA系列)质粒至K562细胞,实验组细胞TET2的mRNA和蛋白表达抑制率均50%,基因组羟甲基化水平显著下降。对照组细胞无变化。4.TET2沉默K562细胞的增殖及集落生成能力较对照组细胞显著增强(P0.05)。5.TET2沉默K562细胞对IM的敏感性较对照组细胞显著降低(P0.05)。结论:1.本研究未检测到CML-CP及CML-BC患者TET2基因突变。2.CML-CP患者BMMNCs及CD34+细胞中TET2基因表达水平均较正常人明显降低。3.运用慢病毒载体干扰技术成功沉默K562细胞中TET2基因的表达。4.沉默TET2基因表达能促进K562细胞在体外的增殖和集落形成。5.沉默TET2降低了K562细胞对IM的敏感性。
【关键词】：TET2 慢性髓细胞白血病 CD34~+ K562 伊马替尼
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.72
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料和方法11-23
• 实验结果23-29
• 讨论29-32
• 结论32-33
• 参考文献33-38
• 综述:miR-22对TET2调控的研究进展38-49
• 参考文献43-49
• 中英文缩略词汇表49-51
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文51-52
• 致谢52-54

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本文编号：700275