γ-分泌酶抑制剂对耐雷帕霉素人成骨肉瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

发布时间：2017-08-20 02:23

  本文关键词：γ-分泌酶抑制剂对耐雷帕霉素人成骨肉瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

  更多相关文章： 骨肉瘤 雷帕霉素 γ-分泌酶抑制剂 多药耐药 凋亡 p53

【摘要】：目的：通过研究1,-分泌酶抑制剂(DAPT)、雷帕霉素(RAPA)对骨肉瘤细胞株增殖、侵袭及凋亡的影响,初步研究DAPT对骨肉瘤细胞耐药逆转可能性,探讨在骨肉瘤多药耐药机制中mTOR通路、Notch通路与相关影响因素的联系。方法：体外建立培养耐RAPA骨肉瘤MG-63细胞株；噻唑蓝(MTT)比色法检测耐RAPA骨肉瘤MG-63细胞株的耐药指数,测定不同浓度的RAPA、 DAPT对2种细胞株增殖影响；划痕试验测定2种细胞株的迁移能力；Transwell法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力,对比2种药物干预下各细胞株侵袭过程中迁移率的差异；Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪测定不同药物对2种细胞株凋亡的影响;Western blot法检测不同药物作用下各细胞株中p53蛋白的表达。结果：MTT结果显示RAPA及DAPT均能抑制2种细胞株的增殖。Transwell结果表明2种细胞株在不同浓度药物作用下迁移率出现明显差异。流式检测凋亡发现RAPA、DAPT均能诱导2种细胞株细胞发生凋亡,骨肉瘤MG-63细胞早、晚期凋亡率均与药物干预剂量呈正比,而实验组耐雷帕霉素MG-63细胞与空白对照组细胞比较,仅在高剂量药物作用下,早、晚期凋亡率差异存在统计学意义。Western blot检测结果表明,在不同浓度RAPA、 DAPT药物作用下,2种细胞株中p53表达量存在差异,骨肉瘤MG-63细胞p53表达量呈药物剂量依赖性,而耐雷帕霉素MG63细胞p53的表达量则未随药物浓度升高而明显增加。结论：RAPA、DAPT均能有效抑制骨肉瘤MG-63细胞及耐雷帕霉素MG-63细胞的增殖、侵袭,并促进其发生凋亡,随着γ-分泌酶抑制剂浓度升高,耐雷帕霉素的骨肉瘤细胞株发生凋亡的程度、时间及p53蛋白的表达,相比骨肉瘤MG-63细胞均有明显差异。这与阻断mTOR后可能会降低骨肉瘤细胞对DAPT的敏感性有关,然后,Notch信号通路与p53在凋亡过程中的联合作用被同步抑制。
【关键词】：骨肉瘤 雷帕霉素 γ-分泌酶抑制剂 多药耐药 凋亡 p53
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩写对照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 1 材料和方法14-35
• 2 结果35-50
• 3 讨论50-54
• 4 结论54-55
• 参考文献55-64
• 附录164-65
• 附录265-66
• 附录366-67
• 附录467-68
• 综述68-81
• 参考文献72-81
• 致谢81-82
• 攻读学位期间发表的学术论文目录82

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本文编号：704184