Hsa-miR-146a通过抑制NF-κB通路诱导去势抵抗性前列腺癌凋亡的研究

发布时间：2017-08-22 19:04

  本文关键词：Hsa-miR-146a通过抑制NF-κB通路诱导去势抵抗性前列腺癌凋亡的研究

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【摘要】：目的：研究表明hsa-miR-146a可能与前列腺癌的发生发展有关,本实验通过体外实验探讨hsa-miR-146a对去势抵抗性前列腺癌细胞株DU145及PC3细胞生物学行为的影响,鉴定hsa-miR-146a调控的下游靶基因,系统的揭示hsa-miR-146a在前列腺癌发生发展中的相关分子机制,并初步探讨hsa-miR-146a增强去势抵抗性前列腺癌细胞对TRAIL促凋亡作用的敏感性。方法：应用MicroRNAs芯片及实时定量PCR检测去势抵抗前列腺癌和激素依赖前列腺癌组织中hsa-miR-146a的表达差异。通过流式细胞术检测转染hsa-miR-146a/NC对前列腺癌细胞株凋亡的影响；通过靶基因预测软件TargetScan等预测hsa-miR-146a在前列腺癌的潜在靶基因,荧光素酶报告基因(Luciferase)检测hsa-miR-146a与潜在靶基因3'UTR的结合能力,通过Western Blot实验检测其靶基因表达;体外用TRAIL、 hsa-miR-146a干预前列腺癌细胞株DU145和PC3,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验法检测细胞活性；通过Hoechst染色方法观察高表达miRNA-146a、TRAIL对前列腺癌细胞凋亡的影响。结果：MicroRNAs芯片结果显示,在去势抵抗性前列腺癌组织中hsa-miR-146a的表达水平相比于激素依赖性前列腺癌组织中的表达水平相比显著下降,实时定量PCR验证了芯片结果(P0.05)；流式细胞术检测细胞凋亡情况,结果显示miR-146a组DU145和PC3细胞凋亡率显著高于NC组；预测软件及荧光素酶报告基因(Luciferase)实验证实hsa-miR-146a与TRAF6、IRAK1的3'UTR直接结合；Western Blot实验发现hsa-miR-146a抑制TRAF6、IRAK1的表达。MTT实验结果显示随着TRAIL剂量增大,细胞活性降低,hsa-miR-146a组细胞活性显著低于阴性对照(NC)组；Hoechst染色显示在应用TRAIL干预的前列腺癌细胞中,转染hsa-miR-146a后细胞凋亡率显著高于阴性对照(NC)组。结论：以上结果表明hsa-miR-146a在去势抵抗性前列腺癌组织中低表达,TRAF6、 IRAK1是hsa-miR-146a的潜在靶基因,并且hsa-miR-146a抑制其靶基因的表达,促进前列腺癌细胞的凋亡；TRAIL能够促进前列腺癌细胞凋亡,而且hsa-miR-146a能够增强前列腺癌细胞对TRAIL促凋亡作用的敏感性。
【关键词】：hsa-miR-146a DU145 PC3 去势抵抗性前列腺癌 TRAIL TRAF6 IRAK1 凋亡
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-14
• 第一章 文献综述14-19
• 第二章 材料与方法19-45
• 第三章 结果45-52
• 第四章 讨论52-56
• 结论56-57
• 参考文献57-60
• 作者简介60-61
• 致谢61

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1 蒋亮;Hsa-miR-146a通过抑制NF-κB通路诱导去势抵抗性前列腺癌凋亡的研究[D];东南大学;2015年

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本文编号：720839