姜黄素对5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用的增强效应与机理研究

发布时间：2017-08-24 20:28

  本文关键词：姜黄素对5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用的增强效应与机理研究

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【摘要】：目的1.探讨姜黄素与5-FU联合应用对体外培养人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用;了解一定剂量姜黄素与较低剂量5FU联用对SGC-7901细胞的生长抑制作用能否达到较高剂量5-FU单用的效果。2.探讨姜黄素与5-FU联合应用对体外培养人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;了解一定剂量姜黄素与较低剂量5FU联用诱导SGC-7901细胞凋亡的作用能否达到较高剂量5-FU单用的效果。3.探讨姜黄素与5-FU联合应用对体外培养人胃癌SGC-7901细胞的周期影响作用;了解姜黄素与较低剂量5-FU联用诱导SGC-7901细胞周期的影响能否达到较高剂量5-FU单用的效果。4.初步揭示姜黄素与5-FU联用诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的的作用机制,为临床上联合应用姜黄素和5-FU治疗胃癌、提供实验依据。方法1.利用基于酶标仪的MTT方法检测姜黄素(20μmol/L)和5-FU(10、20、40μmol/L)单独或联合应用对体外培养人胃癌SGC-7901细胞生长与增殖的影响。2.利用PI单染的流式细胞检测法和基于AV-FITC/PI双染的流式细胞检测法分析姜黄素及其联合5-FU对胃癌SGC-7901细胞凋亡和增殖周期的影响。3.利用基于酶标仪的比色法检测姜黄素及其联合5-FU对胃癌SGC-7901细胞凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8活性的影响。4.利用Western blot方法检测姜黄素及其与5-FU联用对人胃癌SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。结果1、姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞增殖的抑制作用:与对照组相比,各实验组能显著抑制SGC-7901细胞增殖(*P0.05);姜黄素联合低剂量5-FU的抑制率高于中剂量的5-FU单用(*P0.05);姜黄素联合中剂量5-FU的抑制率高于高剂量的5-FU单用(*P0.05)。2、姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞凋亡的影响:各实验组SGC-7901细胞的凋亡率都显著高于对照组(*P0.05);姜黄素联合低剂量5-FU组细胞的凋亡率为39.3%,显著高于中剂量5-FU单用组的26.4%(*P0.05);姜黄素联合中剂量5-FU组细胞的凋亡率为43.9%,显著高于高剂量5-FU单用组的31.9%(*P0.05)。3、姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞增殖周期的影响:与对照组相比,姜黄素和5-FU均可引起SGC-7901细胞在S期的阻滞(*P0.05);姜黄素联合低剂量5-FU组与中剂量5-FU单用组相比,处于S期的细胞比例由41.2%上升至42%(*P0.05);姜黄素联合中剂量5-FU组与高剂量5-FU单用组相比,处于S期的细胞比例由的45.6%上升至53.8%(*P0.05)。4、姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8活性的影响:与对照组相比,姜黄素和5-FU组均可引起SGC-7901细胞Caspase-3、Caspase-8相对活性的显著增加;姜黄素联合低剂量5-FU组与中剂量5-FU单用组相比,Caspase-3的相对活性百分比由0.14倍(1.14±0.08)增加至0.18倍(1.18±0.09),Caspase-8的相对活性百分比由0.10倍(1.10±0.09)增加至0.13倍(1.13±0.07)(*P0.05);姜黄素联合中剂量5-FU组与高剂量5-FU单用组相比,Caspase-3、Caspase-8相对活性分别由原来的0.35倍(1.35±0.03)、0.19倍(1.19±0.01)增加至0.4倍(1.40±0.03)、0.28倍(1.28±0.09)(*P0.05)。5、姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响:与对照组相比,实验组的Bax蛋白表达显著增加,而(*P0.05);姜黄素联合低剂量5-FU组与中剂量5-FU单用组相比,Bax蛋白表达显著增加(相对值分别为2.56±0.09;1.33±0.01),而Bcl-2蛋白表达显著降低(相对值分别为0.76±0.04;0.88±0.05);姜黄素联合中剂量5-FU组与高剂量5-FU单用组相比,Bax蛋白表达显著增加(相对值分别为3.27±0.06;2.19±0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(相对值分别为0.33±0.01;0.53±0.02)(*P0.05)。结论1、姜黄素与低剂量5-FU联用对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的的生长抑制和促凋亡作用能够达到高剂量5-FU单用的效果;2、姜黄素与低剂量5-FU联用对胃癌SGC-7901细胞的凋亡蛋白酶Caspase-3和Caspase-8相对活性的增强效应显著高于高剂量5-FU单用的效果;3、姜黄素与低剂量5-FU联用与高剂量5-FU单用对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的Bax蛋白表达显著增加、Bcl-2蛋白表达显著降低。
【关键词】：姜黄素 5-FU 胃癌 细胞凋亡 细胞周期 实验研究
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 中英文对照缩略词表13-14
• 前言14-17
• 材料与方法17-34
• 1、药物与试剂17
• 2、主要仪器17-18
• 3、主要试剂的配制18-20
• 4、细胞株20
• 5、主要研究方法20-34
• 5.1、人胃癌SGC-7901 细胞的培养20-21
• 5.2、对实验用药浓度的确立——基于酶标仪的MTT法21-23
• 5.3、对胃癌细胞生长抑制作用的检测——基于酶标仪的MTT法23-24
• 5.4、胃癌细胞凋亡的检测—基于AV-FITC/PI双染的流式细胞检测法24-26
• 5.5、胃癌细胞细胞周期的检测—基于PI单染的流式细胞检测法26-28
• 5.6、凋亡蛋白酶Caspase-3 与Caspase-8 活性检测——基于酶标仪的比色法28
• 5.7、Bcl-2、Bax蛋白表达的检测——基于Western blot法28-34
• 结果34-40
• 1. 姜黄素联合 5-FU对SGC-7901 细胞增殖的抑制作用34-35
• 2. 姜黄素联合 5-FU对SGC-7901 细胞凋亡的影响35-36
• 3. 姜黄素联合 5-FU对SGC-7901 细胞周期的影响36-38
• 4. 姜黄素联合5-FU对SGC-7901细胞Caspase-3、Caspase-8 活性的影响38-39
• 5. 姜黄素联合 5-FU对SGC-7901 细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响39-40
• 讨论40-49
• 结语49-50
• 参考文献50-55
• 附录 综述55-68
• 参考文献62-68
• 在校期间论文发表情况68-69
• 致谢69

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本文编号：732981