PPAPDC1A在乳腺癌发生发展中的作用及机制

发布时间：2017-08-28 18:51

  本文关键词：PPAPDC1A在乳腺癌发生发展中的作用及机制

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【摘要】：背景乳腺癌发病率占女性恶性肿瘤的首位,转移是引起乳腺癌患者死亡的主要原因。磷脂酸磷酸酶2域1A(phosphatidic acid phosphatase type 2 domain containing 1A,PPAPDC1A)是磷脂酸磷酸酶家族的重要成员之一,主要功能是引起底物的去磷酸化而参与细胞的增生、运动等,可能与肿瘤的发生发展相关。已有的研究仅为通过基因表达谱芯片分析发现,PPAPDC1A是正常乳腺组织和乳腺癌组织间的一个差异表达基因,未见深入研究的相关报道。本课题组利用基因表达汇编(gene expression omnibus,GEO)公共数据库验证了上述结果,PPAPDC1A是否与乳腺癌的发生发展相关及调控机制尚不清楚。目的本研究从细胞和组织水平分析PPAPDC1A在正常乳腺和乳腺癌中的表达情况,通过体外实验,研究PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭的影响及相关的分子机制,试图阐明PPAPDC1A在乳腺癌发生发展中的作用及机制。方法1.通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)和Western blotting方法检测PPAPDC1A在正常乳腺上皮细胞HBL-100、低转移乳腺癌MCF-7细胞、高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞和MDA-MB-435S细胞中的表达。2.通过免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法检测PPAPDC1A在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌组织中的表达。3.转染PPAPDC1A重组表达质粒和靶向si RNA,通过Western blotting方法检测乳腺癌细胞中PPAPDC1A蛋白的表达;通过CCK-8实验检测乳腺癌细胞增殖情况;通过划痕、Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化。4.利用GEO公共数据库,通过基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)的方法分析乳腺癌中PPAPDC1A高表达组中上调的信号通路。5.通过Western blotting、免疫荧光共定位和免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验检测PPAPDC1A和FAK之间相互作用情况。结果1.q PCR和Western blotting结果均显示:3种不同转移能力的乳腺癌细胞中PPAPDC1A m RNA和蛋白表达水平均显著高于正常乳腺上皮细胞(P0.01),且高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞和MDA-MB-435S细胞中PPAPDC1A m RNA和蛋白表达水平均显著高于低转移乳腺癌MCF-7细胞(P0.01)。2.IHC结果显示:PPAPDC1A在正常乳腺、乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中阳性表达率分别为11.36%、48.10%和77.08%。PPAPDC1A在乳腺纤维腺瘤(χ2=16.774,P0.01)和乳腺癌(χ2=53.001,P0.01)组织中阳性表达率均显著高于正常乳腺组织,在乳腺癌组织中阳性表达率显著高于乳腺纤维腺瘤组织(χ2=15.799,P0.01)。3.Western blotting结果显示:MCF-7-PPAPDC1A细胞中PPAPDC1A的表达显著高于MCF-7-vector细胞(P0.01)。转染PPAPDC1A-si RNA的MDA-MB-231细胞和MDA-MB-435S细胞中PPAPDC1A的表达均显著低于阴性对照组细胞(P0.01)。4.CCK-8结果显示:MCF-7-PPAPDC1A细胞的生长速度较MCF-7-vector显著增快(P0.01)。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2的生长速度分别显著低于阴性对照组细胞(P0.01)。5.细胞划痕结果显示:MCF-7-PPAPDC1A细胞的迁移速度较MCF-7-vector显著增快。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2细胞的迁移速度则分别显著慢于阴性对照组细胞。6.Transwell迁移、侵袭结果均显示:MCF-7-PPAPDC1A细胞中迁移、侵袭的细胞数量明显多于MCF-7-vector细胞(P0.01)。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2细胞中迁移、侵袭的细胞数量分别显著少于阴性对照组细胞(P0.01)。7.GSEA结果显示:Focal adhesion信号通路在PPAPDC1A高表达的乳腺癌中出现上调,且通路相关基因显著富集(P0.05)。8.Western blotting结果显示:转染PPAPDC1A重组表达质粒和靶向PPAPDC1A-si RNA的乳腺癌细胞中FAK和PPAPDC1A蛋白的表达呈正相关关系。9.免疫荧光共定位结果显示:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435S中均存在PPAPDC1A和FAK的共定位,共定位于细胞膜和细胞质。10.Co-IP实验结果显示:PPAPDC1A和FAK蛋白之间存在相互作用。结论1.PPAPDC1A在乳腺癌中高表达,促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,在乳腺癌的发生发展中具有重要作用。2.FAK是PPAPDC1A在乳腺癌上述作用中的重要分子靶点。
【关键词】：磷脂酸磷酸酶2域1A基因 粘着斑激酶基因 乳腺癌 增殖 侵袭
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一部分 从细胞和组织水平分析PPAPDC1A的表达15-30
• 1 材料与方法15-26
• 2 结果26-30
• 第二部分 PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭能力的影响30-43
• 1 材料与方法30-35
• 2 结果35-43
• 第三部分 PPAPDC1A调节乳腺癌细胞侵袭转移的机制43-49
• 1 材料与方法43-45
• 2 结果45-49
• 讨论49-53
• 结论53-54
• 参考文献54-57
• 综述：乳腺癌转移相关基因的研究进展57-69
• 参考文献64-69
• 附录69-71
• 攻读学位期间发表文章情况71-72
• 致谢72-73
• 个人简历73

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本文编号：748955