醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表达的影响

发布时间：2017-08-30 08:11

  本文关键词：醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表达的影响

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【摘要】：[目的]观察体外应用醋酸棉酚(GAA)对人舌鳞癌Cal-27细胞生长的影响,检测GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞ER基因甲基化水平及ER、PR、c-fos基因的mRNA表达的影响,为通过改变ER基因的甲基化状态治疗肿瘤提供实验和理论依据。[方法]1、常规培养人舌鳞癌Cal-27细胞,用不同浓度GAA处理细胞,倒置显微镜下观察处理前后人舌鳞癌Cal-27细胞的形态学改变；2、通过CCK-8法检测不同浓度的GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞生长的影响,并计算GAA作用的IC50值；3、通过甲基化特异性PCR(MS-PCR)及重亚硫酸氢盐修饰后测序法(BS-PCR)检测人舌鳞癌Cal-27细胞在GAA作用48h后ER基因甲基化状态的改变情况;4、通过QPCR检测人舌鳞癌Cal-27细胞在GAA作用48h后ER、PR、c-fos基因mRNA的表达变化。[结果]1、加入不同浓度的GAA后,在倒置显微镜下见人舌鳞癌Cal-27细胞体积缩小,与周围的细胞脱离,胞体缩小变圆,后期细胞死亡,破裂成碎片状且随GAA浓度的增高、作用时间的延长,现象更加明显;2、CCK-8法检测显示,GAA作用24h-72h后,药物对人舌鳞癌Cal-27细胞生长产生抑制作用,在一定剂量范围内具有浓度及时间依赖性。测得24h、48h、72h的ICso值分别为12.56μmol/L、5.87μmol/L、4.00μmol/L;3、以终浓度2.5μmol/L,5.0μmol/L,10.0μmol/L的GAA分别作用于人舌鳞癌Cal-27细胞48h,MS-PCR检测显示GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞的ER基因启动子区CpG岛的高甲基化状态产生部分逆转作用；BS-PCR检测显示逆转作用在10.0umol/LGAA浓度时达到最大程度,2.5μmol/L GAA处理48h后ER基因启动子区CpG岛1号点位发生10%的去甲基化,5.0μmol/L GAA处理48h后ER基因启动子区CpG岛1号点位发生40%的去甲基化,10.0μmol/L GAA处理48h后ER基因启动子区CpG岛1、2、4号点位均发生去甲基化,去甲基化的程度分别是60%、10%、40%。4、QPCR检测显示,2.5μmol/L,5.0μmol/L,10.Oμmol/L的GAA分别作用48h后,与对照组相比较,ER、PR、c-fos基因的mRNA表达水平升高(P0.05)。[结论]1、GAA能抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的生长,在一定的范围内,GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞的抑制具有浓度及时间的依赖性；2、一定浓度的GAA能够使人舌鳞癌Cal-27细胞系ER基因启动子区CpG岛的甲基化程度降低；3、一定浓度的GAA能够使人舌鳞癌Cal-27细胞系ER、PR、c-fos基因的mRNA表达水平增高。
【关键词】：人舌鳞癌 醋酸棉酚 雌激素受体 甲基化
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.86
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-37
• 结果37-53
• 讨论53-59
• 结论59-60
• 参考文献60-65
• 综述65-71
• 参考文献69-71
• 攻读学位期间获得的学术成果71-72
• 致谢72

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1 杨乐;醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表达的影响[D];昆明医科大学;2016年

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本文编号：758177