p53调节EGFR-TKI对三阴性乳腺癌细胞敏感性研究

发布时间：2017-09-01 11:33

  本文关键词：p53调节EGFR-TKI对三阴性乳腺癌细胞敏感性研究

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【摘要】：目的与背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,亦是女性主要的癌症死亡原因。根据雌激素受体(Estrogen receptor, ER)、孕激素受体(Progesterone receptor, PR)、人表皮生长因子受体(Human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)及Ki-67表达不同将乳腺癌分为不同的分子亚型。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer, TNBC)是一种特殊的乳腺癌分子亚型,其主要特点为ER、PR、HER2均阴性表达。目前,TNBC缺乏内分泌和针对HER-2靶向治疗机会,化疗是治疗TNBC的主要策略,预后比其他类型的乳腺癌差。乳腺癌中表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)过度表达与肿瘤体积大、分化差以及预后不良有关,乳腺癌各种分子亚型均可见EGFR的过度表达,但TNBC中EGFR的表达率(约70%)明显高于其他各分子亚型。吉非替尼为小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI),目前临床主要应用于非小细胞肺癌的治疗,其在乳腺癌中的应用已经展开临床研究,但是疗效不明显。乳腺癌患者对EGFR-TKI耐药是该类药物应用于乳腺癌的重要障碍。乳腺癌中约30%的患者表现为p53基因突变,而80%TNBC存在p53高表达。有研究称p53基因突变可能与非小细胞肺癌对EGFR-TKI耐药有关。MDA-MB-468细胞系为TNBC细胞系,其特点为p53基因突变及EGFR过度表达,该细胞系对EGFR-TKI不敏感。本课题旨在运用p53腺病毒(携带野生型p53)转导MDA-MB-468细胞系,观测EGFR-TKI对TNBC细胞系MDA-MB-468细胞的敏感性影响。方法首先收集2012年1月至2013年8月就诊于山东省肿瘤防治研究院乳腺病中心行手术治疗初治浸润性乳腺癌病例共264例。分析各种分子亚型乳腺癌中p53与EGFR的表达及二者的相关性。然后采用Ad-p53(重组p53腺病毒)和EGFR-TKI(吉非替尼)处理MDA-MB-468细胞系,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的变化；克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力；流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期的变化；Westernblot检测p53及EGFR的表达,PI3K/Akt通路及凋亡通路相关蛋白的表达；裸鼠移植瘤实验观察Ad-p53联合吉非替尼抗裸鼠移植瘤的作用。结果临床病理资料分析显示,TNBC中p53突变表达与EGFR过度表达明显高于二者在其他分子分型中的表达,p53突变与EGFR过度表达在TNBC中呈现明显的正相关。MTT结果显示,Ad-p53感染MDA-MB-468细胞系后,该细胞对吉非替尼敏感性增加。流式细胞技术检测结果显示：对照组、Ad-p53组、吉非替尼组及联合组细胞凋亡率分别为8.5%、17.4%、20.5%及32.6%,细胞G2/M周期比率分别为21.9%、31.5%、45.4%及65.3%。Ad-p53联合吉非替尼处理细胞后细胞凋亡及细胞周期检测结果显示：细胞凋亡明显增加,G2/M期周期阻滞明显,具有统计学差异(均P0.05)。Western blot检测结果显示,Ad-p53联合吉非替尼,p-Akt蛋白水平明显下调(F=105.7,P0.01),caspase-9以及cleaved caspase-3蛋白活性增加(均P0.01)。裸鼠乳腺癌移植瘤中Ad-p53组、吉非替尼组及联合组抑瘤率(Tumor inhibition rate, TIR)分别为35.7%、28.7%及74.4%。Ad-p53及吉非替尼联合用药能够明显缩小肿瘤体积,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.p53基因突变与EGFR在TNBC过度表达,且二者表达呈明显的正相关。2.p53突变可能是三阴性乳腺癌对TKI耐药的重要因素。3.野生型p53基因可能通过下调PI3K/Akt通路活性增加MDA-MB-468细胞系对TKI的敏感性,并启动caspase级联反应促进细胞凋亡。4.修饰p53基因表达可以调节TNBC细胞对TKI的靶向耐药。
【关键词】：三阴性乳腺癌 MDA-MB-468细胞系 p53基因突变 重组人p53腺病毒 表皮生长因子受体 酪氨酸激酶抑制剂
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 研究生导师和课题指导小组介绍5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 主要符号表11-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 材料与方法15-23
• 2.1 实验试剂与仪器15-16
• 2.2 实验资料与方法16-23
• 第三章 结果23-30
• 3.1 临床资料分析结果23-25
• 3.2 体外实验结果25-28
• 3.3 体内实验结果28-30
• 第四章 讨论30-35
• 4.1 三阴性乳腺癌的认识30
• 4.2 浸润性乳腺癌p53突变与EGFR过度表达及其相关性分析30-31
• 4.3 p53调节EGFR-TKI对三阴性乳腺癌细胞敏感性的研究31-35
• 第五章 结论35-36
• 第六章 参考文献36-40
• 综述40-49
• 参考文献47-49
• 攻读学位期间取得的研究成果49-50
• 致谢50

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本文编号：771840