PML（ΔNLS）和氯化锂对白血病NB4细胞增殖与凋亡影响的研究

发布时间：2017-09-02 14:32

  本文关键词：PML（ΔNLS）和氯化锂对白血病NB4细胞增殖与凋亡影响的研究

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【摘要】：第一部分重组慢病毒LV5-PML(?NLS)的构建及其对NB4细胞增殖与凋亡的影响目的:通过重组慢病毒介导的PML(ΔNLS)过表达,研究其对白血病NB4细胞增殖与凋亡的影响,并对其作用机制进行探讨。方法:以真核质粒p CMV-HA-PML(?NLS)为PCR反应模板,体外扩增PML(?NLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与包装辅助质粒p Helper 1.0、p Helper 2.0在脂质体2000的作用下共转染293T细胞,包装病毒。利用重组慢病毒LV5-PML(ΔNLS)感染NB4细胞,RT-PCR法验证PML(?NLS)m RNA的转录程度,Western blot检测PML(?NLS)、Akt、p-Akt(ser473)、S6和p-S6(ser235/236)蛋白表达的变化。CCK-8实验观察各组细胞增殖活力;100 nmol/L雷帕霉素处理各组细胞,24h后流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化。结果:成功构建携带PML(?NLS)的慢病毒,病毒感染NB4细胞,感染效率达82.74%,LV5-PML(?NLS)携带的PML(?NLS)能够在NB4细胞中稳定表达;感染LV5-PML(?NLS)的NB4细胞中p-Akt(ser473)和p-S6(ser235/236)蛋白表达上升(P0.05),而Akt和S6蛋白表达无明显变化;CCK-8结果显示,与未感染组和感染LV5-NC组相比,感染LV5-PML(ΔNLS)组NB4细胞增殖活力明显上升(P0.05);流式细胞术结果显示,感染重组慢病毒PML(ΔNLS)组G1期细胞比例下降,进入S期细胞比例增多,且凋亡率明显低于感染LV5-NC组和未感染组(P0.05)。结论:成功构建了重组慢病毒PML(?NLS),PML(?NLS)过表达可通过活化Akt信号通路促进NB4细胞体外增殖,降低其凋亡率,并影响S6蛋白磷酸化。第二部分氯化锂对NB4细胞增殖与凋亡的作用目的:利用氯化锂处理NB4细胞,探讨其对NB4细胞增殖与凋亡的影响。方法:以0-40 mmol/L浓度的氯化锂作用于NB4细胞,培养24 h,CCK-8实验观察细胞增殖情况,Western blot检测各种细胞Akt1蛋白表达水平。以20 mmol/L浓度的氯化锂作用于NB4细胞,培养24 h,FCM法分析细胞凋亡与周期变化,Western blot检测各组细胞b-catenin,p-GSK-3,GSK-3 and c-Myc蛋白表达水平。结果:0-40 mmol/L氯化锂抑制NB4细胞增殖,使Akt1蛋白表达下降。20 mmol/L氯化锂作用于NB4细胞后,细胞凋亡率上升,细胞周期阻滞在G2/M期,c-Myc蛋白表达下降,p-GSK-3,b-catenin蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达无明显变化。结论:氯化锂可通过抑制GSK-3b促进NB4凋亡,诱导细胞周期阻滞在G2/M期;同时影响Akt1,b-catenin,c-Myc蛋白表达水平。
【关键词】：PML(ΔNLS) NB4细胞 重组慢病毒 增殖 凋亡 氯化锂 NB4细胞 增殖 凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7;R730.43
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 参考文献13-15
• 第一部分:重组慢病毒LV5-PML(ΔNLS)的构建及其对NB4细胞增殖与凋亡的影响15-28
• 1 材料与方法15-20
• 2 结果20-25
• 3 讨论25-27
• 参考文献27-28
• 第二部分：氯化锂对NB4细胞增殖与凋亡的影响28-36
• 1 材料与方法28-30
• 2 结果30-32
• 3 讨论32-34
• 参考文献34-36
• 全文总结36-37
• 文献综述37-45
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 攻读硕士期间发表文章46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 阳小群;王慧;蒋开玲;朱新瑜;马鹏鹏;刘北忠;;腺病毒介导的PML(NLS~-)过表达对白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响[J];基础医学与临床;2014年10期

2 ;Lithium inhibits proliferation of human esophageal cancer cell line Eca-109 by inducing a G_2/M cell cycle arrest[J];World Journal of Gastroenterology;2008年25期

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本文编号：779148