基于NRP-1为靶点分子探针的构建及其在脑胶质瘤磁共振分子成像中的应用

发布时间：2017-09-02 18:30

  本文关键词：基于NRP-1为靶点分子探针的构建及其在脑胶质瘤磁共振分子成像中的应用

  更多相关文章： 神经纤毛蛋白 脑胶质瘤 磁共振分子成像 tLyP-1 体外实验

【摘要】：目的:检测不同脑胶质瘤细胞系中神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的相对表达水平并筛选本实验理想的实验对象;合成以NRP-1为靶点、t Ly P-1为配体、USPIO为核心的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1并检测其理化性质及生物毒性;检测USPIO-PEG-t Ly P-1同脑胶质瘤细胞的特异性结合能力;观察USPIO-PEG-t Ly P-1同脑胶质瘤细胞结合后在细胞内的分布情况。方法:1传代培养人U87、U251、H4及大鼠C6脑胶质瘤细胞系,以HUVEC为阳性对照、正常大鼠脑组织为阴性对照,利用RT-PCR及Western-Blot从基因及蛋白水平分别检测NRP-1的相对表达水平,利用细胞免疫荧光技术观察NRP-1的亚细胞定位。2利用质谱法验证合成的多肽为试验所需的t Ly P-1(CGNKRTR);电子显微镜观察USPIO的形状及粒径;利用碳二亚胺法合成USPIO-PEG-t Ly P-1,并通过动态光散射法检测其水合粒径;观察USPIO-PEG-t Ly P-1在溶液中的稳定性;利用核磁共振T2map序列检测USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1的横向弛豫时间T2值并计算其倒数R2值;利用MTS比色法检测USPIO-PEG-t Ly P-1的细胞毒性。3利用普鲁士蓝染色法检测不同浓度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞系的结合能力;利用核磁共振T2map序列检测不同浓度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞结合后的横向弛豫时间T2值并计算其倒数R2值。4利用透射电子显微镜观察USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞的结合情况,并探索USPIO-PEG-t Ly P-1在脑胶质瘤细胞内的分布情况。结果:1在四种脑胶质瘤细胞系中均有NRP-1的高水平表达,其中浸润能力强、恶性程度相对较高的U87脑胶质瘤细胞系中NRP-1的表达水平最高,差异具有统计学意义。2合成的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1的水合粒径为43.84 nm,在理化性质上符合磁共振分子成像的要求;在磁共振应用的有效浓度范围内(?50μg Fe/ml),USPIO-PEG-t Ly P-1无明显细胞毒性,对细胞存活无显著影响。3普鲁士蓝染色结果显示USPIO-PEG-t Ly P-1较USPIO-PEG具有更强的同U87脑胶质瘤细胞结合的能力,蓝染颗粒更多、更明显;体外磁共振成像结果显示在相同Fe浓度条件下USPIO-PEG-t Ly P-1组U87细胞的R2值高于USPIO-PEG组U87细胞的R2值,差异具有统计学意义。4透射电子显微镜观察结果显示USPIO-PEG-t Ly P-1能够同U87脑胶质瘤细胞特异性结合,并主要分布于内质网、线粒体及溶酶体等细胞器中。结论:本实验合成的以七肽t Ly P-1为配体、USPIO为核心的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1是一种生物安全性好、成像敏感度高的磁共振分子探针。体外实验证实,分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1能够靶向结合NRP-1高表达的脑胶质瘤细胞系并产生良好的磁共振T2阴性对比效果,为下一步的动物实验及今后的临床试验奠定了实验基础。
【关键词】：神经纤毛蛋白 脑胶质瘤 磁共振分子成像 tLyP-1 体外实验
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R445.2;R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-28
• 结果28-31
• 附图31-40
• 附表40-42
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述 基于氧化铁纳米颗粒的神经影像技术在脑胶质瘤诊治中应用的研究进展52-61
• 参考文献58-61
• 致谢61-62
• 个人简历62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 魏新华;陈婧;杨蕊梦;张桂香;肖云华;任继亮;徐向东;江新青;;整合素靶向性超顺磁性纳米分子探针体外显像人肝癌细胞的实验研究[J];中华临床医师杂志(电子版);2015年05期

2 陈万青;郑荣寿;曾红梅;邹小农;张思维;赫捷;;2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J];中国肿瘤;2015年01期

3 林祖岩;董白晶;赵天书;康现鑫;李庆腊;刘晓谦;;脑胶质瘤神经干细胞治疗研究进展[J];现代生物医学进展;2014年06期

4 崔向丽;林松;;胶质母细胞瘤国际诊疗指南比较评价[J];中国神经肿瘤杂志;2013年02期

5 张子栋;严飞;李翔;郑海荣;刘新;张丽娟;常胜合;邱本胜;;LyP-1标记超顺磁性氧化铁的制备及体外成像[J];中国医学影像技术;2011年05期

6 林冰影;张景峰;张敏鸣;;不同粒径和浓度超顺磁性氧化铁MR信号特征的实验研究[J];浙江大学学报(医学版);2010年02期

7 孙涛;王文宏;;磁纳米粒子热疗在神经胶质瘤中的应用进展[J];临床神经外科杂志;2008年04期

，

本文编号：780207