MiR-138、miR-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-09-03 01:24

  本文关键词：MiR-138、miR-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

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【摘要】：背景结肠癌在恶性肿瘤发病率中居第三位,在肿瘤相关死亡原因中居第四位。尽管近年来手术、化疗、放疗和靶向治疗等治疗方法有了较大进步,但结肠癌的高转移率和高病死率仍是重大的难题,因此进一步阐明结肠癌发生发展的分子机制,成为结肠癌研究的热点。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类大小长约20~25个核苷酸的单链非编码RNA,通过与靶mRNA的3'-UTR区不完全或完全互补结合的方式调控基因表达,影响细胞生长、增殖、分化和凋亡等多种生物学过程。目的探讨miRNA(miR-138、miR-145)对人结肠癌Caco-2细胞迁移、增殖及细胞周期等生物学行为的影响及对增殖相关蛋白c-myc表达水平的影响。以期为后续进一步研究miR-138、miR-145在结肠癌中的生物学功能和具体调控机制,从而为结肠癌早期诊断及治疗提供实验依据。方法构建miR-138、miR-145及阴性对照(Negative control,NC)质粒,并培养结肠癌Caco-2细胞,将实验分为3组进行:miR-138组、miR-145组及NC组。采用脂质体转染法将miR-138、miR-145及NC质粒转入Caco-2细胞,并于不同时间点在倒置荧光显微镜下观察细胞生长状态及转染效率。采用细胞划痕实验检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞迁移的影响;以噻唑蓝(MTT)增殖试验检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞周期的影响。分别提取miR-138、miR-145转染组及NC组细胞总蛋白,用免疫印迹法检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对增殖相关蛋白c-myc表达水平的影响。结果Caco-2细胞转染miR-138、miR-145及NC质粒后,miR-138组、miR-145组细胞划痕愈合速度较NC组细胞划痕愈合速度较慢,差异有统计学意义(p0.05)。MiR-138组、miR-145组细胞增殖活力与NC组相比明显受到抑制,差异有统计学意义(p0.05)。同时miR-138组、miR-145组细胞与NC组细胞相比,G1期百分比增高,差异有统计学意义(p0.05),S期、G2期百分比则无明显变化(p0.05)。免疫印迹法检测发现miR-138组、miR-145组的Caco-2细胞中c-myc蛋白表达水平较NC组降低。结论MiR-138、miR-145在结肠癌Caco-2细胞中过表达,可以抑制细胞的迁移和增殖能力,并可使细胞发生G_1期阻滞,减慢细胞周期进程。同时miR-138、miR-145可降低增殖相关蛋白c-myc的表达水平,从而抑制细胞的增殖。
【关键词】：细胞迁移 细胞增殖 细胞周期 结肠癌 微小核糖核酸
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-26
• 结果26-29
• 讨论29-31
• 小结31-32
• 附图32-34
• 参考文献34-37
• 综述：MicroRNAs作为潜在的肿瘤标志物:机遇与挑战37-51
• 参考文献44-51
• 附录51-52
• 攻读学位期间发表文章情况52-53
• 致谢53-54
• 个人简历54

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