MicroRNA-30a-5p影响肺癌细胞增殖及迁移的研究

发布时间：2017-09-03 00:34

  本文关键词：MicroRNA-30a-5p影响肺癌细胞增殖及迁移的研究

  更多相关文章： miR-30a-5p 肺癌 乳酸脱氢酶A 细胞增殖 细胞迁移

【摘要】：背景：肺癌是世界范围内发病率及致死率最高的癌症,其中80%属于非小细胞肺癌。尽管肺癌的临床研究取得了较大的进展,早期的诊断技术不断改进,手术、放化疗及生物治疗等治疗技术不断进步,但是非小细胞癌的5年生存率仍然很低。仅依靠临床研究来提高肺癌患者的生存率及降低复发率是不够的,加强病因发病学(特别是相关基因)的研究并开发诊断和治疗肺癌的新靶点成为当前迫切的问题,而miRNA的发现及深入研究提供了这种可能。微小RNA (MicroRNAs)是一类长约22个碱基的内源性单链非编码RNA。miRNA可与靶基因mRNA的3'非编译区(3'UTR)中的位点互补结合通过降解mRNA或抑制mRNA翻译两种方式调节靶基因的表达,进而影响生命活动。它的表达及功能失调常常会引起多种重要过程的紊乱,包括细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡等。在肿瘤的发生过程中,不同的miRNA可能起着类似抑癌基因或者癌基因的作用。miR-30a-5p作为miRNA中的一种,近年有报道其在与多种肿瘤密切相关。然而,miR-30a-5p在肺癌中的所发挥的作用尚不清楚。目的：探讨miR-30a-5p在肺癌中的差异性表达及临床意义,进一步研究miR-30a-5p影响肺癌细胞增殖及迁移的可能机制,为明确肺癌发病机制提供重要的理论依据,并也有助于为肺癌诊断和治疗寻找可能的的潜在靶标。方法：通过实时定量PCR技术,分别检测miR-30a-5p在临床患者的术后肺癌组织及相应的无瘤正常组织中、多种肺癌细胞株及人正常胚肺细胞株的表达量进行检测。就miR-30a-5p的肺癌组织中的表达水平与患者多种临床病理因素(年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期、肿瘤转移)及临床预后分别进行统计学的相关性分析。。利用生物信息学软件(MiRanda、RNAhybrid和Findtar3软件)预测1niR-30a-5p可能作用的靶基因。利用双荧光素酶报告基因分析实验对靶基因进行验证。通过实时定量PCR和免疫印迹等实验进一步考察,：niR-30a-5p在mRNA水平和蛋白水平上对靶基因的调控作用。通过细胞增殖、细胞平板克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、细胞划痕及Transwell迁移实验研究转染miR-30a-5p对肺癌细胞增殖及迁移等生物学特性的影响。构建稳定过表达miR-30a-5p的肺癌细胞株A549-miR-30a-5p并用其进行裸鼠移植瘤成瘤实验,观察荷瘤小鼠移植瘤生长情况；进行免疫组化实验检测移植瘤中细胞核增殖、细胞凋亡及其所调控的基因的蛋白表达情况。结果：在临床肺癌标本及多种肺癌细胞株中,miR-30a-5p均呈现低表达。miR-30a-5p在已发生转移的肺癌组织样本中的表达量更低。miR-30a-5p的低表达与肿瘤TNM分期及是否转移呈正相关(P0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度均无相关性(P0.05); miR-30a-5p的低表达与不良预后呈正相关(P0.05)。乳酸脱氢酶A(以下简称LDHA)是miR-30a-5p作用的靶基因。miR-30a-5p可直接结合于LDHA mRNA的3'UTR并抑制荧光素酶的活性。在A549和H460细胞株中,过表达miR-30a-5p可抑制LDHA蛋白的表达量,并不改变LDHA mRNA的表达量。转染miR-30a-5p模拟物或siR-LDHA小干扰RNA均可抑制肺癌A549和H460细胞的体外增殖、迁移；转染miR-30a-5p或siR-LDHA可引起肺癌A549和H460细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,但两者均不会引起A549和H460肺癌细胞的凋亡。成功构建了稳定过表达miR-30a-5p的A549-miR-30a-5p肺癌细胞株；裸鼠体内移植瘤成瘤实验的。结果提示,过表达miR-30a-5p可抑制肺癌A549细胞在裸鼠体内的移植瘤生长。移植瘤免疫组化实验结果表明,过表达miR-30a-5p可抑制肺癌细胞移植瘤中PCNA和LDHA蛋白的表达；过表达miR-30a-5p不能促进移植瘤细胞在体内的凋亡。结论：miR-30a-5p在临床肺癌肿瘤组织及肺癌细胞中均低表达；1miR-30a-5p的低表达与肺癌TNM分期,有无转移及肺癌临床不良预后均具有正相关性。乳酸脱氢酶A (LDHA)是miR-30a-5p在肺癌中的靶基因。过表达miR-30a-5p可抑制LDHA的蛋白的表达,引起体外肺癌细胞的生长周期阻滞,抑制肺癌肿瘤细胞的体外增殖；抑制肿瘤细胞的迁移；抑制肿瘤细胞在裸鼠体内的生长。引起
【关键词】：miR-30a-5p 肺癌 乳酸脱氢酶A 细胞增殖 细胞迁移
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-17
• 1. 材料与方法17-46
• 2. 结果46-70
• 3. 讨论70-75
• 小结75-76
• 参考文献76-85
• 综述85-95
• 参考文献91-95
• 附录：英汉缩略语名词对照95-97
• 致谢97-98
• 攻读学位期间发表的学术论文目录98

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈芳琳;陈正堂;;绿色荧光蛋白基因标记的肺癌细胞株的建立[J];重庆医学;2007年19期

2 高利伟;朱文;冯志华;安宁;;高转移和低转移人大细胞肺癌细胞株的比较蛋白组学研究[J];四川大学学报(医学版);2008年05期

3 夏梁,蔡伟丽,张丽娟,孙一娜,肖雪媛,何大澄;体外培养的不同亚型肺癌细胞株差异蛋白的初步分析[J];现代仪器;2004年01期

4 孙继丽,贺修胜,余艳辉,陈主初;BNIP3L基因在肺癌组织中的表达及结构分析[J];癌症;2004年01期

5 宋春林,陈耀勇,邹东霆,李冰,葛曰萍;肺癌细胞株肺癌相关基因差异表达分析[J];江西医学检验;2004年05期

6 王炳胜;石德光;翟书悦;刘登凯;张秀丽;刘秀芳;张海;;益气活血方对肺癌细胞株上皮细胞粘附分子表达及侵袭能力的影响[J];中国中医药信息杂志;2006年09期

7 朱彦君;夏伟;曹国军;丁红梅;高亚萍;杨光;邵宁生;;不同转移能力肺癌细胞株差异非编码RNA的鉴定[J];中华肿瘤防治杂志;2009年04期

8 杨桂青;王东;王义善;王园园;杨柯;;黑蒜提取液对Lewis肺癌细胞株的放疗增敏作用[J];中国中西医结合杂志;2013年08期

9 盛智,徐光;二苯乙烯类化合物对肺癌细胞株生长的抑制作用[J];上海医科大学学报;1998年05期

10 林琳,黄震宇,张中华,杨瑶琴,胡晶莹,朱明洁,许凯黎;应用免疫PCR法检测肺癌细胞株方法的建立[J];肿瘤;1998年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王勇;李德冠;吴红英;王月;英璐路;孟爱民;樊飞跃;;辐射耐受肺癌细胞株的初步建立[A];中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2008年

2 王军臣;符雪莲;高勇;李琦;;G蛋白偶联受体家族C型5A(GPRC5A)在肺癌组织中的表达[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

3 周永列;胡惟孝;吕亚萍;邱莲女;王文松;杨忠愚;刘建栋;饶国武;;四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549体内外作用的实验研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

4 刘洁薇;侯梅;李潞;许峰;尤嘉琮;李洋;刘彬;祖玲玲;周清华;;运用改良抑制消减杂交法对人不同转移潜能大细胞肺癌细胞株差异表达基因的筛选及验证[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年

5 罗猛;邓益;侯梅;李潞;许峰;尤嘉琮;李洋;刘彬;祖玲玲;周清华;;骨桥蛋白在不同转移潜能肺癌细胞株中的差异表达及其与肺癌转移相关功能研究[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年

6 鲁为山;李书军;刘彬;李洋;罗猛;孙丽亚;尤嘉琮;周清华;;不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株转移相关miRNAs的筛选研究[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年

7 许庆勇;徐向英;高媛;刘珊珊;胡松柳;;反复射线照射诱导辐射抗拒肺癌细胞株的建立及其基因表达谱分析[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年

8 陆燕蓉;林苹;张洁;周宏远;黄孝忠;宁其志;杨可;;HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株的筛选及其生物学特征[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

9 罗猛;刘迪;刘成武;梅宏;周清华;;慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变[A];2012贵州省医学会胸心血管外科年会论文集[C];2012年

10 周永列;胡惟孝;吕亚萍;邱莲女;王文松;杨忠愚;刘建栋;饶国武;;四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549体内外作用的实验研究[A];2006年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 肖伟;肺癌Th1/Th2的漂移及黄芪、川芎嗪促逆转作用的研究[D];山东大学;2004年

2 李定彪;Nm23-H1基因调控肺癌细胞PKA信号通路及其分子机理的实验研究[D];四川大学;2004年

3 莫晓媚;肺癌细胞株中miRNA的筛选及miR-544a促进肺癌细胞转移的机制研究[D];中国海洋大学;2014年

4 胡文献;转录因子KLF4抑制肺癌发生、发展的作用研究[D];浙江大学;2008年

5 胡燕婕;肺癌呼气特征性VOCs的筛选及诊断价值研究[D];浙江大学;2010年

6 陈刚;血管内皮生长因子对肺癌细胞株药物敏感性影响的初步研究[D];中国协和医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 罗斌;MicroRNA-30a-5p影响肺癌细胞增殖及迁移的研究[D];广西医科大学;2015年

2 康艳霞;热疗联合化疗对肺癌细胞株作用的实验研究[D];第四军医大学;2008年

3 王晓睿;YB-1蛋白在人类不同肺癌细胞株中的表达[D];重庆医科大学;2007年

4 蔡红艳;抗胃泌素释放肽前体McAb的鉴定及其对肺癌细胞株生长的影响[D];山西医科大学;2007年

5 牛韧;MicroRNA-128在肺癌细胞株中的表达及其意义[D];河北医科大学;2014年

6 赵晓鹏;miRNA-449a在肺癌细胞株中的表达及其生物学功能研究[D];河北医科大学;2013年

7 庄莹;P-S6K1在肺癌中的表达与雷帕霉素治疗敏感性的关系[D];广州医学院;2009年

8 邱小明;不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株基因表达谱变化的研究[D];四川大学;2007年

9 王勇;RASGRF2真核表达载体构建、肺癌稳定细胞株建立及功能的初步研究[D];重庆医科大学;2012年

10 吕彦天;CD40信号在肺癌细胞株H1299增殖、趋化、侵袭中的作用及其机制[D];苏州大学;2011年

，

本文编号：781853