Genistein抑制裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤生长的研究

发布时间：2017-09-03 07:22

  本文关键词：Genistein抑制裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤生长的研究

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【摘要】：背景:卵巢恶性肿瘤致死率居妇科恶性肿瘤首位。其中卵巢上皮性肿瘤占85%~90%。约63%的上皮性卵巢癌患者在发现时已有广泛转移,其五年生存率约27%[1]。在理想的肿瘤细胞减灭术基础上,影响卵巢癌患者生存率的重要因素是化疗后肿瘤复发或对化疗药物的获得性耐药。因此,探寻新型有效的抗癌制剂成为而今卵巢癌治疗研究的重要课题。Genistein(称为金雀异黄素)是抗癌活性最强的天然的异黄酮类化合物。它作为酪氨酸蛋白激酶抑制剂,具有多种生物学活性,包括弱雌激素样作用、抗氧化作用、抑制血管生成作用、调节细胞周期作用等。研究表明genistein有预防肿瘤、抗肿瘤作用,并且能增强多种耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[2,3]。因此,天然药物genistein以低毒高效的优势受到广泛关注。然而genistein水溶性差,生物利用度低[4]。在大多数的体内外实验中,通常用二甲基亚砜(DMSO)作为实验药物的溶剂,但是DMSO对细胞的毒副作用不可忽视,它不仅影响实验效果,而且也限制了药物的临床应用[5]。本实验采用羟丙基-β-环糊精作为药物的辅料,经其包合后,药物溶解度、稳定性及生物利用度均得到了提高[6]。多项研究表明,micro RNAs可调节细胞增殖和凋亡,并调节癌症相关信号通路,在肿瘤的形成发展中发挥着重要的生物学功能。近年来,发现上皮间质转化(EMT,epithelial-mesenchymal-transition)与肿瘤细胞的侵袭及转移密切相关。micro RNAs可通过相关信号通路调节EMT,进而影响肿瘤的发生发展。目的:本课题以人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤为研究对象,给予genistein不同剂量单独应用及genistein低剂量与顺铂联合应用,通过观察移植瘤体积、抑瘤率及E-cadherin m RNA、mi R-200a和E-cadherin蛋白的表达情况,探讨Genistein对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,为Genistein在上皮性卵巢癌的临床应用提供理论依据。方法:1细胞培养:在RPMI-1640培养基(含10%胎牛血清)中培养人卵巢癌SKOV3细胞系。将培养瓶放在37℃、含5%CO2的培养箱中。2建立裸鼠移植瘤模型、进行实验分组:选取BALB/C/nu/nu无胸腺裸小鼠,雌性,4~6周龄,体重16-18g,在SPF级环境下饲养。常规无菌培养SKOV3细胞,将对数生长期细胞配制成2.5×107个/ml单细胞悬液,在无菌条件下接种于裸鼠皮下,每只裸鼠接种0.2ml(约5×106个细胞)单细胞悬液。观察移植瘤生长情况,于接种第7天选出移植瘤直径在4~7mm的裸鼠进行试验,将选出的模型随机分成:对照组(辅料组)Genistein低、中、高剂量组,顺铂组,顺铂+Genistein低剂量组。每组6只裸鼠。3制备实验药物:实验药物均用0.9%氯化钠注射液配制成所需浓度,立即使用。4给药方法:Genistein低、中、高剂量分别按含genistein 50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg腹腔注射,每天一次,连续21天;对照组按Genistein高剂量组所含羟丙基β-环糊精量进行腹腔注射,每天一次,连续21天;顺铂组以3mg/kg进行腹腔注射,每天一次,连用7天,21天后处死;Genistein低剂量+顺铂组用药方法同两药单独给药方法。5测量裸鼠重量及移植瘤体积和重量:自接种后开始每天观察裸鼠精神、饮食、大便、活动及生长等情况。用药前及用药后每周测裸鼠体重,移植瘤的最长径(a)和最短径(b),计算移植瘤体积V(mm3)=πab2/6。处死裸鼠剥取瘤组织后称重,计算抑瘤率IR(%)=(1-治疗组移植瘤平均瘤重/对照组移植瘤平均瘤重)×100%。6 RT-q PCR检测瘤组织中E-cadherin m RNA、mi R-200a的表达。7免疫组化检测瘤组织中E-cadherin蛋白的表达情况。8统计学方法:采用SPSS21.0统计学软件对实验数据进行处理。以P0.05为差异具有统计学意义。结果:1给药过程顺利。(1)随用药时间的延长,各组裸鼠体重均有增长。顺铂组和联合用药组裸鼠体重增长缓慢,与对照组比较差异有统计学意义。Genistein不同剂量组和对照组裸鼠体重增长明显,组间比较差异无统计学意义。(2)在精神状态、饮食、活动性方面,顺铂组和联合用药组裸鼠表现差;Genistein不同剂量组和对照组裸鼠表现好。顺铂组对裸鼠精神状态、饮食、活动性的影响,比联合用药组严重。Genistein不同剂量组与对照组对其影响无明显差别,且均比顺铂组和联合用药组好。(3)随时间延长各组瘤体积均逐渐增大,治疗组移植瘤平均体积均小于对照组。比较各组抑瘤率为:联合用药组顺铂组Genistein包合物高剂量组中剂量组低剂量组。2移植瘤组织中E-cadherin m RNA和mi R-200a表达情况:各组均有E-cadherin m RNA和mi R-200a表达。顺铂组和对照组E-cadherin m RNA和mi R-200a呈低表达;在Genistein不同剂量组呈高表达,且随Genistein剂量增加,表达增强。顺铂组E-cadherin m RNA的表达与对照组相比,差异无统计学意义;Genistein低剂量组E-cadherin m RNA的表达与顺铂组和对照组比较,差异有统计学意义;分析Genistein不同剂量组和对照组,除Genistein中剂量组和高剂量组之间差异无统计学意义外,其余两两比较均差异有统计学意义。顺铂组、联合用药组、Geinstein低剂量组与对照组相比,mi RNA200a的表达差异无统计学意义;除Genistein高剂量组分别与对照组、Genistein低剂量组比较对mi RNA200a表达差异有统计学意义外,其余组两两比较差异均无统计学意义。3移植瘤组织中E-cadherin蛋白表达情况:所有分组均有E-cadherin蛋白的表达。在对照组、顺铂组、联合用药组和Genistein低剂量组呈低表达;在Genistein中、高剂量组呈高表达,随Genistein剂量增加,表达增强。顺铂组、联合用药组与对照组相比,差异无统计学意义。分析Genistein不同剂量组和对照组,除Genistein高、中剂量组与对照组比较,E-cadherin蛋白表达差异有统计学意义外,其他各组两两比较差异无统计学意义。结论:1 Geinstein在抑制肿瘤生长同时,不会影响裸鼠的生存状态。并且可减轻化疗药物的毒副作用。2 Genistein与顺铂均具有抑制肿瘤生长的作用,呈剂量依赖性;联合用药比单独用药对肿瘤生长的抑制作用更强,但统计学分析差异无统计学意义,可能与样本量小有关。3 Genistein可增加E-cadherin m RNA及mi RNA200a的表达,且呈剂量依赖性。Genistein也可增强E-cadherin蛋白的表达,也呈剂量依赖性。
【关键词】：卵巢癌 SKOV3 Genistein miR-200a E-cadherin
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-23
• 附图23-29
• 附表29-34
• 讨论34-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述 与EMT相关的机制研究进展44-54
• 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 高振芹;胡永斌;周建华;;MAPK信号通路与上皮间质转型[J];国际病理科学与临床杂志;2009年04期

2 袁鹏;黄艳红;辛晓燕;宋晖;田爽;于月成;王德堂;;Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响[J];肿瘤防治研究;2006年03期

3 唐勇;王辉;陈伟娟;李文通;李洪利;赵修世;;EMT经p38-MAPK调节乳腺癌MCF-7细胞P-gp介导的多药耐药[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年02期

4 Ferenc Sipos;Orsolya Galamb;;Epithelial-to-mesenchymal and mesenchymal-to-epithelial transitions in the colon[J];World Journal of Gastroenterology;2012年07期

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本文编号：783635