HBV相关HCC的循环microRNA差异表达谱研究

发布时间：2017-09-04 08:15

  本文关键词：HBV相关HCC的循环microRNA差异表达谱研究

  更多相关文章： 肝细胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222

【摘要】：肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌的主要类型,近年来发病率和死亡率都呈增高趋势。目前,临床上尚无很好的肝癌早期诊断指标,大部分患者确诊时已是中晚期。由于错过了有效的治疗时机,导致预后差、生存率低。因此,寻找一种敏感而特异的HCC早期诊断指标仍是有必要的。许多研究发现miRNA在HCC患者的血清或血浆中表达失调,可能对HCC有早期诊断价值。然而,目前还没有肝癌特异性循环mi RNA在乙肝病毒(HBV)相关小HCC与HBV相关良性肝病的差异表达谱的相关研究报道。通过比较以发现在HBV相关小HCC中差异表达的miRNAs有助于HBV相关HCC的早期诊断。目的:本研究拟通过对人类乙型肝炎病毒(HBV)相关的小肝细胞癌(HCC)、肝硬化、肝炎病人和正常人循环microRNA(miRNA)表达谱比较,筛选出循环中差异表达的miRNA。方法:选取HBV相关小HCC(23例)、乙肝肝硬化(20例)、乙肝肝炎(20例)及健康对照(16例)血浆/血清标本,利用miScript miRNA PCR Array检测84个人类相关miRNA在以上标本中的表达,以倍数变化≥2表示有差异,筛选出各组较正常组差异表达的循环miRNA。进一步选取肝癌(30例)、肝硬化(30例)、肝炎(30例)和健康人(30例)血清标本,分别提取各自的总RNA,采用quantitative real-time reverse-transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR)法检测血清miR-222在各组的表达量,并对筛选结果进行验证。结果:在血浆PCR array两次实验中,健康对照、慢乙肝与肝硬化三组43个miRNAs扩增曲线和溶解曲线均良好,但内参变化倍数超过2;肝癌组84个miRNAs均未扩增。综合分析血清两次实验结果,质控达标,59个miRNAs的扩增曲线和溶解曲线均良好。慢乙肝、肝硬化和小HCC三组血清中相对于健康对照共有18个差异表达的miRNAs,分别为9个(miR-17、miR-195、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-25、miR-92a、miR-15b、miR-16)、3个(miR-195、miR-25、miR-16)、11个(miR-100、miR-17、miR-18a、mi R-195、mi R-19a、miR-20a、miR-223、miR-25、miR-145、miR-15b、miR-16)miRNAs上调,1个(miR-205)、3个(miR-125b、miR-205、miR-26b)、3个(miR-200a、mi R-205、miR-222)miRNAs下调;在三组中均上调的有miR-195、miR-25、mi R-16,均下调的有miR-205;其中仅在小HCC中上调的为miR-18a、miR-100、mi R-145、miR-223四个基因,变化倍数分别为3.48、2.95、2.12、3.91,下调的为miR-200a、miR-222,变化倍数分别为0.39、0.50。进一步以表达下调的miR-222进行验证,健康对照组、肝炎组、肝硬化组及肝癌组血清miR-222的相对表达量分别为1.799±1.898、2.210±2.340、2.167±2.173及1.056±1.024,表明miR-222表达在肝癌组较正常组低表达。结论:本研究发现慢乙肝、肝硬化和小HCC三组血清中相对于健康对照共有18个差异表达的miRNAs,其中有6个miRNAs在HBV相关的小HCC血清中较其它良性肝病差异表达,为选择HBV-HCC早期诊断有关的miRNA和大样本验证奠定了基础。血清miR-222的表达在肝癌组较正常组降低,提示miR-222可能与HCC的发生发展相关。
【关键词】：肝细胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、HBV相关HCC的循环microRNA差异表达谱研究15-40
• 1.1 对象和方法15-27
• 1.1.1 实验对象15
• 1.1.2 临床病例资料采集15-17
• 1.1.3 主要实验仪器17
• 1.1.4 主要实验试剂17-18
• 1.1.5 主要实验步骤18-27
• 1.2 结果27-37
• 1.2.1 血浆标本mirScripts miRNA PCR Array结果27
• 1.2.2 血清标本mirScripts miRNA PCR Array结果27-37
• 1.3 讨论37-39
• 1.4 小结39-40
• 二、血清miR-222在HCC中差异表达分析40-47
• 2.1 对象和方法40-43
• 2.1.1 实验对象40
• 2.1.2 主要仪器设备40
• 2.1.3 主要实验试剂40-41
• 2.1.4 主要实验步骤41-43
• 2.2 结果43-44
• 2.3 讨论44-46
• 2.4 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-56
• 综述 microRNA在肝癌中的研究进展56-70
• 综述参考文献64-70
• 致谢70-71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈勇;刘巍;;microRNA影响抗肿瘤药物敏感性相关研究进展[J];临床肿瘤学杂志;2009年09期

2 牛晓晓;王秦秦;;microRNA与肺癌[J];中国肺癌杂志;2010年04期

3 刘静;王小中;;慢性粒细胞白血病相关microRNA的研究进展[J];分子诊断与治疗杂志;2010年04期

4 LEE Younghee;LUSSIER Yves A;;Identification of common microRNA-mRNA regulatory biomodules in human epithelial cancer[J];Chinese Science Bulletin;2010年31期

5 唐志强;;The effect of microRNA-21-siRNA-lentivirus on biological behaviors in human hepatic cancer cell line hepG2[J];China Medical Abstracts(Surgery);2012年01期

6 ;PTEN and PDCD4 are Bona Fide Targets of microRNA-21 in Human Cholangiocarcinoma[J];Chinese Medical Sciences Journal;2012年02期

7 林建宇;朱雨捷;王晶;汤溢飞;徐中华;;急性冠状动脉综合征相关microRNA靶向通路及其功能分析[J];苏州大学学报(医学版);2012年04期

8 崔洪亮;张阳德;;microRNA的协同调控网的构建与研究[J];中国现代医学杂志;2012年33期

9 张明杰;徐卓明;朱丽敏;龚霄雷;黄蕊;;先天性心脏病重度肺动脉高压血浆 microRNA 的分析与验证[J];上海医学;2013年12期

10 孟胜喜;胡义扬;冯琴;;microRNA在中医药防治非酒精性脂肪性肝病中的应用[J];中华中医药杂志;2014年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 荆清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因调控新功能[A];中国生理学会第五届全国心血管、呼吸和肾脏生理学学术会议论文摘要汇编[C];2005年

2 靳新;骆志刚;王金华;管乃洋;;microRNA靶标研究进展[A];中国遗传学会功能基因组学研讨会论文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全国生物化学与分子生物学学术大会论文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐卫;缪扣荣;方成;朱华渊;董华洁;王冬梅;范磊;乔纯;李建勇;;慢性淋巴细胞白血病microRNA异常表达研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2013年

6 金希;厉有名;;单纯性脂变与非酒精性脂肪性肝炎间差异microRNA表达谱研究[A];2009香港-北京-杭州内科论坛暨2009年浙江省内科学学术年会论文汇编[C];2009年

7 贾新正;卢肖男;聂庆华;张细权;;鸡部分microRNA的同源预测与克隆验证[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年

8 李炯;段德民;郑克孝;;新型非标记高通量microRNA芯片技术[A];第一届全国生物物理化学会议暨生物物理化学发展战略研讨会论文摘要集[C];2010年

9 徐小涛;陆晓;孙婧;束永前;;肺癌侧群细胞microRNA表达谱检测及初步分析[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

10 王俊峰;李巍;吴小江;阮康成;;大鼠附睾microRNA表达谱的研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 陈英云 乔蕤琳;哈医大成功研发国内首例microRNA转基因及敲减小鼠模型[N];黑龙江经济报;2010年

2 记者 陈青;2厘米以下肝癌检出率88%[N];文汇报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 崔洪亮;microRNA的肿瘤表达研究及协同调控网络分析[D];中南大学;2014年

2 马建华;高粱低磷低氮形态生理特征及低氮响应的microRNA研究[D];山西农业大学;2014年

3 李虔桢;microRNA相关基因遗传多态性与冠心病临床关联及预后研究[D];福建医科大学;2015年

4 王耀辉;血清microRNA作为乳腺癌诊断标志物的研究[D];复旦大学;2014年

5 周霁子;环境因素对心脏畸形胎儿影响的表观遣传学机制[D];复旦大学;2013年

6 张丽;microRNA通过调控小胶质细胞炎性反应参与血管性认知障碍发生发展[D];复旦大学;2014年

7 查若鹏;肝癌转移相关microRNA的鉴定及其分子机制研究[D];复旦大学;2013年

8 方砚田;结肠癌干细胞分选、差异microRNA表达谱检测以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在结肠癌干细胞自我更新的机制研究[D];复旦大学;2014年

9 辛成齐;椰枣microRNA鉴定及其在果实发育过程中的表达谱研究[D];中国科学院北京基因组研究所;2015年

10 李栋;先天性心脏病血浆microRNA表达谱及与GATA4靶序列单核苷酸多态性的关联研究[D];山东大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 高智红;应用多样性增量方法识别人类基因组microRNA前体序列[D];内蒙古大学;2010年

2 王娜娜;microRNA进化关系及编码特性研究[D];内蒙古大学;2007年

3 王玫;小麦microRNA的鉴定与分析[D];南昌大学;2007年

4 秦保东;原发性胆汁性肝硬化microRNA表达谱的检测及其功能研究[D];第二军医大学;2013年

5 吴晓妍;基于纳米复合材料及生物放大技术构建的电化学microRNA传感器的研究[D];西南大学;2015年

6 周景辉;2型糖尿病microRNA表达谱及其信号通路研究[D];华南理工大学;2015年

7 姜溪;血浆microRNA-486、microRNA-499在肺癌中的表达及临床价值的研究[D];河北大学;2015年

8 林杉;营养诱导舍饲绵羊非繁殖季节发情相关microRNA筛选及其靶基因功能验证[D];石河子大学;2015年

9 林妹妹;microRNA-192 和 microRNA-21 在 IBD 患者中的表达情况[D];福建医科大学;2015年

10 徐娇阳;循环microRNA用于低氧性肺动脉高压早期诊断的实验研究[D];石河子大学;2015年

，

本文编号：790352