顺铂联合乳酸杆菌在宫颈癌治疗中对免疫因子IL-10、TGF-β1影响的实验研究

发布时间：2017-09-04 08:46

  本文关键词：顺铂联合乳酸杆菌在宫颈癌治疗中对免疫因子IL-10、TGF-β1影响的实验研究

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【摘要】：目的:.宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤,是导致女性死亡的第二大癌症。目前中、晚期宫颈癌的治疗仍无统一有效的方法。目前,大部分的观点认为由于肿瘤微环境中免疫抑制因素的存在,使得传统的放、化疗无法降低患者的死亡率,且其无法避免的毒副作用大大降低了患者的生存质量。肿瘤细胞处在肿瘤微环境中可以分泌出各种免疫抑制性因子,比如IL-10以及TGF-β1等;而怎样才能够有效减少或消除肿瘤微环境里面的免疫抑制因素,提高治疗效果,是当前肿瘤治疗领域亟待解决的重要问题。乳酸杆菌为女性阴道的正常优势菌群,对维持阴道正常生态平衡起着关键作用,多项研究结果显示,阴道微生态平衡失调与宫颈癌的发生具有密切的联系。在乳酸杆菌数量降低的情况下,会使得阴道混合性厌氧菌或者是加德纳菌增殖速度加快,形成大量有害物质,并和其他致癌因素(如HPV)联合作用于宫颈,加速了宫颈癌的发展。那么乳酸杆菌联合顺铂治疗宫颈癌是否可以降低或消除肿瘤微环境中免疫抑制因素、增强治疗效果?本次研究将为宫颈癌的治疗提供新的视角。方法:1体外实验1.1培养宫颈癌U14细胞及乳酸杆菌。1.2用顺铂、乳酸杆菌、顺铂+乳酸杆菌刺激宫颈癌U14细胞,对照组为PBS。24h、48h、72h收集细胞,观察U14细胞中TGF-β1、IL-10m RNA的表达。2体内实验取4?6周龄的雌性C57BL/6小鼠40只,随机分为4组,每组10只。取对数生长期U14细胞2×10~6个/0.2ml分别接种于每组小鼠,部位为背部皮下。在接种第八天之后进行抑瘤实验。对照组腹腔注射PBS0.2ml/只,乳酸杆菌组给予乳酸杆菌2.25*10~6/0.2ml/只肿瘤周边进行多部位注射,顺铂组给予顺铂腹腔注射0.2ml/只,乳酸杆菌和顺铂联合组,给予顺铂腹腔注射0.2ml+乳酸杆菌2.25*10~6/0.2ml/只肿瘤周边进行多部位注射。荷瘤小鼠注射等量的PBS作为对照,每天一次,治疗14天。每天检测小鼠体重并使用游标卡尺测量肿瘤大小。停药一天后,处死取瘤。称量瘤重并使用游标卡尺对肿瘤的径线进行测量,根据肿瘤体积计算公式:体积V=长径(L)·短径(W)2/2,对肿瘤体积进行计算。绘制肿瘤体积与生长时间曲线,然后把肿瘤切开,观察肿瘤切面及内部组织。根据公式计算出抑瘤率(IR);10%多聚甲醛固定液固定后,以免疫组化的方法进行TGF-β1、IL-10因子表达的检测。结果:1体外实验:在相应刺激宫颈癌U14细胞48小时后,在m RNA水平顺铂组与联合组TGF-β1、IL-10的表达量各自和对照组、乳酸杆菌组对比均明显减少,具备显著性差异(P0.05)。联合组比顺铂组TGF-β1、IL-10的表达量减少,对比具备显著性差异(P0.05),乳酸杆菌组与对照组对比,减少不明显,差异无统计学意义(P0.05)2体内实验:各组荷瘤小鼠的生长状态:各组小鼠在荷瘤之后的前10天里都具有良好的生长状态,然而在第15天之后差异开始显现,对照组体重有所降低,存在活动量减少以及逐渐消瘦的表现;在用药7天之后顺铂组小鼠有食欲降低表现,并在用药14天后开始出现心动迟缓以及精神萎靡等的现象;至于乳酸杆菌与联合组小鼠的生长状态则相对较好,没有观察到明显体重降低情况。3小鼠移植瘤生长状况及抑瘤率比较:接种瘤细胞之后的前9天里,各组里小鼠肿瘤生长大体保持一致;在第10~14天,对照组小鼠肿瘤生长速度超过另外3组,其中肿瘤生长速度最慢的是联合组小鼠;第15~24天,对照组小鼠肿瘤生长速度最快,要远超过其他3组,而顺铂组与联合组的小鼠出现肿瘤开始变小的情况,其中最显著的是联合组。对照组、乳酸杆菌组、联合组以及顺铂组的肿瘤称重各自是(3.158±0.004)g、乳酸杆菌组(2.901±0.005)g、顺铂组(2.070±0.004)g、联合组(1.576±0.003)g,对照组瘤重大于其他各用药组,各治疗组之间的瘤重两两对比都具备显著性差异;基于抑瘤率公式能够求解到,乳酸杆菌组、联合组以及顺铂组的抑瘤率各自是8%,50%,34%。其中最高的联合组,最低的是乳酸杆菌组。4体内实验的免疫组化结果:在对照组、乳酸杆菌组、顺铂组以及联合组当中,TGF-β1平均光密度值各自是(0.466±0.003)、(0.438±0.002)、(0.144±0.001)、(0.122±0.005);IL-10平均光密度值各自是(0.480±0.005)、(0.472±0.003)、(0.152±0.006)、(0.128±0.002);顺铂组与联合组的TGF-β1、IL-10表达量和对照组、乳酸杆菌组进行两两对比均降低,有显著性差异(P0.05);联合组比顺铂组降低,差异有统计学意义(P0.05),而对照组和乳酸杆菌组对比则差异不明显,无统计学意义(P0.05)。结论:联合组小鼠的一般状况包括活动、食欲及精神状态要优于对照组,并且肿瘤体积要明显小于对照组,在使用顺铂联合乳酸杆菌作用于荷瘤小鼠之后,能够有效下调肿瘤组织中免疫抑制因子TGF-β1及IL-10的表达水平,提示有可能降低肿瘤微环境中免疫抑制效应。二者联合相对于单用化疗药物治疗会更高效且毒副作用少。所以其临床研究价值较高。
【关键词】：顺铂 乳酸杆菌 宫颈癌 白细胞介素-10 转化生长因-β1
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-20
• 结果20-22
• 附图22-26
• 附表26-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 综述 肿瘤微环境与肿瘤免疫耐受36-49
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 个人简历50

【参考文献】

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1 肖冰冰;廖秦平;;阴道微生态研究进展[J];国际妇产科学杂志;2011年06期

2 薛e，

本文编号：790517