miR-328对K562细胞增殖的影响及作用机制

发布时间：2017-09-04 16:47

  本文关键词：miR-328对K562细胞增殖的影响及作用机制

  更多相关文章： miR-328 C/EBPα K562细胞 细胞增殖

【摘要】：目的:构建miR-328过表达及下调表达的真核表达载体,探讨miR-328对慢性粒细胞白血病(CML)急变期细胞株K562细胞增殖的影响及作用机制。方法:构建miR-328过表达及下调表达的真核表达载体hsa-mi R-328及hsa-miR-328-inhibition,核苷酸测序鉴定重组质粒,利用脂质体lipofectamineTM2000介导的基因转移技术将质粒分别转染至K562细胞;通过荧光显微镜观察各组K562细胞的转染情况;通过实时荧光定量PCR检测各组K562细胞中miR-328、C/EBP mRNA的表达水平;CCK-8检测各组K562细胞增殖的情况;Western-Blot方法检测各组K562细胞中C/EBPα蛋白表达的情况。结果:1.成功构建重组真核表达载体:hsa-mi R-328、hsa-miR-328-inhibition;2.将载体转染K562细胞,24h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明重组质粒成功转入K562细胞,48h、72h后可见荧光细胞数逐渐增多;3.实时荧光定量PCR结果显示与空白对照组、Lip2000组、空载体组,hsa-miR-328-inhibition组相比,hsa-mi R-328组的miR-328呈现明显表达,差异有统计学意义(p0.001);4.CCK-8方法检测结果显示与空白对照组、Lip2000组、空载体组,hsa-miR-328-inhibition组相比,has-miR-328组的K562细胞的增殖明显受抑制,差异有统计学意义(p0.001);5.实时荧光定量PCR结果显示与空白对照组、Lip2000组、空载体组,hsa-miR-328-inhibition组相比,has-mi R-328组的K562细胞中C/EBPαmRNA表达无明显变化,差异无统计学意义(p0.05);6.Western-Blot检测发现has-miR-328组的K562细胞中C/EBPα蛋白表达,其他组细胞C/EBPα蛋白均不表达或极低表达。结论:miR-328可以抑制K562细胞增殖,其作用机制可能通过上调C/EBPα的表达。
【关键词】：miR-328 C/EBPα K562细胞 细胞增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.72
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-14
• 第2章 实验材料14-17
• 第3章 实验方法17-24
• 第4章 结果24-31
• 第5章 讨论31-33
• 第6章 结论33-34
• 参考文献34-38
• 附录 综述38-44
• 参考文献42-44
• 作者攻读学位期间的科研成果44-45
• 致谢45

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本文编号：792706