人参皂苷Rh2对结肠癌LoVo细胞迁移和转移能力的影响及其作用机制的初步研究

发布时间：2017-09-04 20:04

  本文关键词：人参皂苷Rh2对结肠癌LoVo细胞迁移和转移能力的影响及其作用机制的初步研究

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【摘要】：研究背景及目的结肠癌是一种常见的发生于结肠部位的恶性消化道肿瘤,随着近年来人们生活水平的提高,饮食结构、放射损伤、肥胖、吸烟、遗传等等诸多因素的影响,我国结肠癌的发病率处于逐渐上升阶段,目前在我国大多数地区已经成为发病率上升最快的恶性肿瘤之一。结肠癌一旦发生就面临做手术、化疗,甚至发生癌变转移、且复发率较高、术后生存期较短,针对这一现状,如何在结肠癌发生早期就积极治疗并预防发生癌变转移,提高结肠癌病人的术后生存率,延长生存期也成为目前的热门研究课题之一。人参是已在我国临床应用超过两千多年的传统的中医补气类药材,是五加科植物人参(Panax ginseng C. A. Mey.)的根,药性甘、微苦,微温,归肺、脾、心经；有大补元气,补脾益肺,生津,安神益智,补诸脏气,抗疲劳,缓解脑神经疲惫之功效。人参皂苷(Ginsenoside)作为人参中主要的活性成分,对癌细胞具有明显的抗侵袭转移作用,可配合手术后服用,增强手术后伤口愈合及体力恢复的速度。人参皂苷Rh2是人参的主要有效成分,能抑制肿瘤细胞的生长、增殖、转移,诱导其凋亡的同时还能将异常分化的肿瘤细胞逆转。人参皂苷Rh2同时与化疗药物联用还可以提高治疗效果、降低副作用。本研究旨在从细胞水平和分子水平方面探讨探讨人参皂苷Rh2对人结肠癌LoVo细胞迁移和转移能力的影响,一方面为阐明人参皂苷Rh2对人结肠癌LoVo细胞活性、增殖、凋亡、迁移和转移能力等的方面作用的影响及其相关的作用机制提供实验研究基础；另一方面为人参皂苷Rh2治疗人结肠癌并预防其癌细胞转移提供实验药理依据。方法：采用MTT比色法对人参皂苷Rh2进行细胞毒性检测。用不同浓度的人参皂苷Rh2处理人结肠癌LoVo细胞,采用MTT比色法检测Rh2对LoVo细胞毒性的影响,根据结果确定最终用于研究抑制LoVo细胞迁移和转移能力作用的影响的Rh2浓度。根据抑制作用适中的药物剂量和药物作用时间,分别设置空白对照组及实验组(5、10、20、 40、60μmol/L),通过划痕试验,对LoVo细胞划痕加药处理24h后观察不同药物浓度对细胞迁移的影响；用Transwell法观察不同药物浓度的人参皂苷Rh2对细胞转移能力的影响；用Western blot法检测不同药物浓度的Rh2对CD44、基质金属蛋白酶MMP-2、基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin以上有表达差异的基因进行蛋白表达水平变化的检测。结果：1.本研究中MTT结果显示,与空白对照组比较,浓度为5、10、20、40μmol/L的Rh2处理LoVo细胞24h后,处理组细胞生长无明显抑制,细胞生存率均无明显差异(P0.05)。当Rh2浓度≥60μ mol/L处理24h、浓度≥40 μ mol/L处理48h、浓度≥20 μ mol/L处理72h时,LoVo细胞生长明显受到抑制,差异具有统计学意义(P0.05),提示人参皂苷Rh2对LoVo细胞活力的影响有时间和浓度依赖性。即Rh2浓度在0至40 μ mol/L范围内处理LoVo细胞24h对LoVo细胞既无细胞毒性作用也不促增殖作用。但随Rh2作用时间的延长和浓度增加,Rh2对LoVo细胞抑制作用增强。所以在后续实验中,把Rh2作用浓度控制在40 μ mol/L以内,作用时间为24h进行研究。2.划痕试验和Transwell结果表明,随着人参皂苷Rh2药物浓度增加,其对LoVo细胞迁移和转移能力的抑制作用增强,20 μ mol/L以上浓度的Rh2处理LoVo细胞24h与对照组相比具有明显抑制作用(P0.05)。3. Westernblot结果表明,随着Rh2药物浓度的升高,CD44、MMP-2蛋白表达水平下降,TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表达水平上升。结论：1.人参皂苷Rh2能抑制LoVo细胞活力及增值,其作用具有时间和浓度的依赖性。2.人参皂苷Rh2对LoVo细胞迁移和转移能力有抑制作用,作用具有时间和浓度依赖性。3.人参皂苷Rh2能下调CD44、MMP-2蛋白的表达水平,上调TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白的表达水平。
【关键词】：人参皂苷Rh2 LoVo细胞 细胞迁移 细胞转移
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一章 文献研究11-19
• 1.1 人参皂苷Rh2的相关功能研究进展11-15
• 1.2 结肠癌的研究进展15-19
• 第二章 实验研究19-45
• 2.1 人参皂苷Rh2对结肠癌LoVo细胞活性的影响19-26
• 2.1.1 主要仪器与设备19
• 2.1.2 实验材料19-20
• 2.1.3 主要溶液及配制20
• 2.1.4 方法20-23
• 2.1.5 结果23-24
• 2.1.6 讨论24-26
• 2.2 人参皂苷Rh2对结肠癌LoVo细胞迁移能力的影响26-31
• 2.2.1 主要仪器与设备26
• 2.2.2 实验材料26
• 2.2.3 主要溶液及配制26-27
• 2.2.4 方法27
• 2.2.5 结果27-29
• 2.2.6 讨论29-31
• 2.3 人参皂苷Rh2对结肠癌LoVo细胞转移功能的影响31-36
• 2.3.1 主要仪器与设备31
• 2.3.2 实验材料31
• 2.3.3 主要溶液及配制31-32
• 2.3.4 方法32
• 2.3.5 结果32-34
• 2.3.6 讨论34-36
• 2.4 人参皂苷Rh2对CD44、MMP-2、TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表达的影响36-45
• 2.4.1 主要仪器与设备36
• 2.4.2 实验材料36-37
• 2.4.3 主要溶液及配制37-39
• 2.4.4 方法39-41
• 2.4.5 结果41-43
• 2.4.6 讨论43-45
• 结语45-47
• 研究总结45
• 存在不足45
• 展望45-47
• 参考文献47-51
• 附录51-53
• 附录1 英文缩略语51-53
• 在校期间发表论文情况53-54
• 致谢54-55
• 统计学审核证明55

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本文编号：793547