胰岛素样生长因子-1受体在人非小细胞肺癌细胞及组织中的表达

发布时间：2017-09-04 22:13

  本文关键词：胰岛素样生长因子-1受体在人非小细胞肺癌细胞及组织中的表达

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【摘要】：目的:体外实验细胞水平检测IGF-1R单克隆抗体对人体非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭力的影响;大体标本免疫组化水平检测IGF-1R在人体非小细胞肺癌不同病理分型、不同分期、不同分化程度表达的差异,对人体非小细胞肺癌的早期诊断提供新的方法,针对IGF-1R通路进行基因靶向治疗的理论和实践基础进行了充分的论证。方法:本研究分为两个部分:在实验室内培养人肺鳞状细胞癌细胞的细胞株和人肺腺癌细胞的细胞株,并进行显微镜观察和免疫组化鉴定。MTT方法检测人体肺鳞状细胞癌的细胞和肺腺癌的细胞的影响,分别以用IGF-1R单克隆抗体100μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、1μg/ml的IGF-IR单克隆抗体作用人肺腺癌细胞的人肺鳞癌细胞48小时,检测IGF-1R单克隆抗体人非小细胞癌细胞增殖的影响并绘制曲线。Transwell小室法检测空白对照组、IGF-1R单克隆抗体组两组细胞的迁移和侵袭能力,观察对人肺腺癌细胞的人肺鳞癌细胞侵袭力的影响,并绘制曲线;通过对48例肺癌鳞状细胞癌、35例肺腺癌大体标本,采用免疫组织化学方法进行IGF-1R检测,比较IGF-1R在肺鳞状细胞癌、肺腺癌不同分期、不同分化程度表达中表达的差异。结果:人非小细胞癌细胞培养48h后,肺癌细胞丧失正常的接触抑制,呈多层性生长,生长代谢极其旺盛,倍增的时间大大缩短,饱和密度变大,分裂指数较正常细胞增高,具有无限增殖能力,并且细胞的浸润能力较正常细胞强;免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌细胞中IGF-IR的表达,结果显示,非小细胞肺癌细胞株普遍表达IGF-IR,以细胞膜和细胞浆的混合型表达为主,免疫组化着色后呈现棕黄色或棕色;MTT检测显示用100μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、1μg/ml的IGF-IR单克隆抗体作用非小细胞肺癌细胞48小时,细胞的增殖受到抑制,抑制率分别为:(8.24±1.02)%、(12.58±0.94)%、(18.41±1.15)%、(21.02±0.87)%,随着IGF-IR单克隆抗体浓度的增加,细胞的增殖的被抑制率也随之增加,不同单克隆抗体浓度组的组间两两相比较,差异具有统计学意义(P0.05);Transwell小室法检测空白对照组、IGF-1R单克隆抗体组细胞细胞迁移和侵袭能力,IGF-1R单克隆抗体组细胞的迁移和侵袭至Transwell小室滤膜下表面的癌细胞数均明显低于空白对照组细胞(P0.01)。IGF-1R特异性表达于人体肺鳞状细胞癌,表达特异性和敏感性分别为57.1%、97.8%,与IGF-1R在人体肺腺癌中的表达相比,两者差异有统计学意义(P0.05)。IGF-1R蛋白的在非小细胞肺癌中表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤个数、血管侵犯、TNM分期等方面的差异无统计学意义(P0.05)。结论:体外实验细胞水平验证IGF-1R单克隆抗体抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭力。IGF-1R蛋白高表达于人肺鳞状细胞癌组织中,可能参与非小细胞肺癌的发展,对肺鳞状细胞癌的早期诊断提供新的思路。
【关键词】：非小细胞癌细胞 IGF-1R 增殖 侵袭力 免疫组化
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-15
• 第一部分IGF -1R单克隆抗体对人非小细胞癌细胞株细胞增殖、侵袭力的影响15-36
• 1 材料19-22
• 1.1 本实验所用的试剂19
• 1.2 仪器19-20
• 1.3 其他仪器20
• 1.4 各种试剂的配制方法20-22
• 2 方法22-26
• 2.1 细胞传代的方法22
• 2.2 细胞计数方法22
• 2.3 免疫细胞化学方法检测IGF-IR的表达22-23
• 2.4 细胞的冻存23
• 2.5 细胞复苏23
• 2.6 IGF-IR MAb的配制23-24
• 2.7 MTT检测细胞增殖情况24
• 2.8 小室法体外侵袭实验24-25
• 2.9 统计学处理25-26
• 3 结果26-30
• 3.1 倒置显微镜观察：26
• 3.2 免疫细胞化学方法检测非小细胞肺癌细胞中IGF-IR的表达26-27
• 3.3 IGF-1R单克隆抗体 对非小细胞肺癌细胞增殖的影响27-28
• 3.4 IGF-1R单克隆抗体 对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭力的影响28-30
• 4 讨论30-33
• 参考文献33-36
• 第二部分IGF-1R在非小细胞肺癌组织中的表达36-53
• 1 材料39-41
• 1.1 标本来源及处理39
• 1.2 实验试剂39-40
• 1.3 所有实验仪器40
• 1.4 其它器材40-41
• 2 方法41-43
• 2.1 免疫组织化学步骤（SP法）步骤41
• 2.2 结果判定41-42
• 2.3 统计学处理42-43
• 3 结果43-48
• 3.1 IGF-1R在非小细胞肺癌组织中的表达（免疫组化）43-44
• 3.2 IGF-1R在肺鳞状细胞癌各个分期、各种分化程度的阳性表达44-45
• 3.3 IGF-1R在肺腺癌各个分期、各种分化程度的阳性表达45
• 3.4 IGF-1R蛋白表达与非小细胞肺癌患者临床病理参数的关系45-46
• 3.5 IGF-1R蛋白表达在肺鳞状细胞癌、肺腺癌中表达的差异46-48
• 4 讨论48-50
• 参考文献50-53
• 综述53-62
• 参考文献59-62
• 致谢62-63
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果63-64
• 个人简历64

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本文编号：794133