TLR5和NLRC4通路对乳腺癌细胞增殖和部分免疫细胞的影响

发布时间：2017-09-05 00:05

  本文关键词：TLR5和NLRC4通路对乳腺癌细胞增殖和部分免疫细胞的影响

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【摘要】：目的:通过重组鞭毛素蛋白探究TLR5和NLRC4通路在抑制人乳腺癌细胞增殖中的作用及其对小鼠中性粒、NK细胞、DC和Treg细胞的影响。方法:试验中用到四种重组鞭毛素蛋白:FliC(激活TLR5和NLRC4),FliCΔ90-97(激活NLRC4),FliC-L3A(激活TLR5),FliCΔ90-97:L3A(不激活TLR5和NLRC4)。1.IPTG诱导表达和镍离子亲和层析法纯化重组沙门氏菌鞭毛素蛋白,通过检测IL-8和IL-1β检验重组鞭毛素蛋白激活TLR5和NLRC4的生物学活性。2.qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞中TLR5和NLRC4的表达;采用CCK8法和克隆形成实验检测重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞增殖的影响,Western-blot检测NF-κB(TLR5)和P10(NLRC4)通路激活情况。3.流式细胞术检测小鼠中性粒细胞,NK细胞,DC和Treg的比例及表面分子。结果:1.重组鞭毛素蛋白的纯度95%,内毒素残留0.01EU/mg蛋白,重组鞭毛素蛋白具有生物学活性。2.重组鞭毛素蛋白对MCF-7和MDA-MB-231细胞有抑制作用,在0.1μg/ml时,MCF-7细胞各组抑制率20%。Western-blot结果显示,在MCF-7细胞FliC和FliC-L3A组胞核蛋白中NF-κB高于对照组,FliC和FliCΔ90-97组检测到caspase1 P10片段。3.流式结果显示FliC、FliCΔ90-97和FliC-L3A使腹腔中性粒细胞和NK细胞比例增加,分别为(8.41±0.04)%和(9.9±2.6)%;(9.1±2.1)%和(10.3±0.3)%;(8.0±0.3)%和(11.0±2.6)%,PBS组为(2.6±1.3)%和(3.2±0.2)%。FliC和FliC-L3A组DC细胞上CD80和CD86表达上调与对照组相比有统计学差异(P0.05)。FliC-L3A组调节性T细胞高于其他组。结论:1.重组鞭毛素蛋白对MCF-7细胞的抑制不完全依赖TLR5或NLRC4,可能存在其他机制。2.TLR5和NLRC4通路在对中性粒和NK细胞的趋化中起重要作用。3.重组鞭毛素蛋白主要通过TLR5通路上调DCs表面CD80和CD86。
【关键词】：重组鞭毛素蛋白 TLR5 NLRC4 免疫细胞 树突状细胞
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 英文略缩词表8-9
• 引言9-10
• 材料与方法10-26
• 结果26-37
• 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-45
• 综述45-53
• 参考文献50-53
• 作者简历53-54
• 致谢54-55
• 学位论文数据集55

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本文编号：794632