葛仙米对二乙基亚硝胺诱发小鼠肝脏癌前病变的干预作用研究

发布时间：2017-09-05 05:10

  本文关键词：葛仙米对二乙基亚硝胺诱发小鼠肝脏癌前病变的干预作用研究

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【摘要】：葛仙米作为一种具有悠久历史的食用藻类,富含多糖与藻胆蛋白。藻多糖及藻胆蛋白具有多种优异的生物活性,其抑癌作用尤其受到医学和食品界的高度关注。本实验以DENA为诱癌剂,建立小鼠肝脏癌变不同时期的动物模型,同时喂食葛仙米藻浆进行干预,以观察葛仙米对DENA导致小鼠肝损伤的保护作用及其肝癌的干预作用。本实验分为4组,即对照组(腹腔注射生理盐水,自由饮用无菌蒸馏水);葛仙米组(腹腔注射生理盐水,自由饮用葛仙米藻浆,代替无菌蒸馏水);诱癌组(腹腔注射DENA,自由饮用无菌蒸馏水)和干预组(腹腔注射DENA,自由饮用葛仙米藻浆,代替无菌蒸馏水)。全部4组小鼠均喂食正常饲料。自诱癌之日起,分别在14 d、28 d、56 d、70 d、84 d处死小鼠,取血清及肝脏组织,通过酶活、蛋白、m RNA水平和组织病理学检测,探讨葛仙米对DENA诱发小鼠肝脏癌前病变的影响和干预作用,为葛仙米的药用和食用价值研发提供科学依据和理论参考。本实验主要结果如下:(1)喂食葛仙米的小鼠在整个实验过程中,与对照组相比,体重增长较快,皮毛光滑柔顺,行动灵敏,精神状态良好;诱癌组小鼠随着DENA处理时间的延长,后期出现食量减少,体型消瘦,精神萎靡等症状;葛仙米干预组小鼠随着实验周期的延长,也出现类似诱癌组小鼠的症状,但出现时间晚于诱癌组,且程度较轻。脏器指数结果显示,诱癌组小鼠及干预组小鼠的肝脏指数显著高于对照组与葛仙米组,而干预组小鼠肝脏指数低于诱癌组小鼠,但差异不大。以上结果说明葛仙米对小鼠有促生长作用,并对DENA导致小鼠的肝损伤有一定程度的保护作用。(2)小鼠血液学指标检测结果显示,葛仙米组小鼠血清中,ALT与AST的活性与对照组无显著差异;诱癌组与干预组小鼠血清中ALT与AST的活性显著高于对照组,干预组小鼠血清中这2种酶的活性都低于诱癌组。该结果也说明葛仙米在一定程度上减轻了DENA对小鼠肝脏的损伤。(3)通过ELISA检测血清中AFP的蛋白含量变化,结果显示,随着实验进程的延长,葛仙米组小鼠血清中AFP蛋白含量维持在正常范围之内,与对照组无显著差异;诱癌组及干预组小鼠血清中AFP的含量显著升高但与诱癌组相比升高较为缓慢。(4)通过实时定量PCR技术检测了小鼠肝脏中AFP、bcl-2、p53、PTEN基因的m RNA水平,结果显示,干预组小鼠肝脏中AFP、bcl-2、p53的相对表达量均低于诱癌组,而PTEN的相对表达量高于诱癌组。(5)小鼠肝脏组织病理学检测结果表明,诱癌组小鼠在14~28 d多呈炎性反应,42~56 d出现嗜酸性肝细胞,此后逐渐形成肝细胞增生结节,70 d后肝细胞大片坏死,出现癌变。干预组小鼠诱癌病症出现较DENA组晚,且程度较浅。结论:喂食葛仙米可明显促进小鼠的生长发育;饲料中添加一定量的葛仙米不仅对DENA诱发小鼠肝脏癌变及其进程具有一定的干预作用,而且对DENA导致小鼠肝毒性和肝损伤具有一定的保护和减缓作用。另外,喂食葛仙米还延迟了DENA诱发小鼠肝脏癌变的进程,并延长了实验处理小鼠的生存时间。
【关键词】：葛仙米 DENA 癌前病变 血液学指标 生化指标 组织病理学
【学位授予单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 缩略语8-12
• 第一章 前言12-26
• 1.1 葛仙米概述12-15
• 1.1.1 葛仙米的生物学和生态学特征12-13
• 1.1.2 葛仙米的地理分布与食用历史13
• 1.1.3 葛仙米的营养成分13-14
• 1.1.4 葛仙米的药用价值14-15
• 1.2 肝癌的生物学概述15-24
• 1.2.1 肝癌的种类16-17
• 1.2.2 肝癌的病因学17-19
• 1.2.3 肝癌的性别差异19-20
• 1.2.4 AFP与肝癌20-21
• 1.2.5 癌基因与肝癌21-22
• 1.2.6 抑癌基因与肝癌22-24
• 1.3 亚硝胺诱发肝癌模型24-25
• 1.4 本研究的目的意义25-26
• 第二章 材料和方法26-35
• 2.1 实验材料26
• 2.1.1 实验动物26
• 2.1.2 诱癌及干预物26
• 2.2 主要设备仪器及试剂26-27
• 2.2.1 主要仪器设备26-27
• 2.2.2 主要试剂27
• 2.2.3 一般试剂27
• 2.3 实验方法27-34
• 2.3.1 诱癌模型的建立27-28
• 2.3.2 样品采集及处理28
• 2.3.3 组织病理学观察28-29
• 2.3.4 肝脏指数29
• 2.3.5 ALT、AST活性测定29-30
• 2.3.6 AFP蛋白含量的测定30-31
• 2.3.7 总RNA提取31-32
• 2.3.8 荧光定量PCR32-34
• 2.4 统计分析34-35
• 第三章 实验结果35-46
• 3.1 葛仙米对DENA处理小鼠的生长和肝脏指数的影响35-38
• 3.1.1 生长35-37
• 3.1.2 小鼠肝脏形态37
• 3.1.3 肝脏指数37-38
• 3.2 葛仙米对DENA处理小鼠血清酶活性的影响38-40
• 3.2.1 ALT38-39
• 3.2.2 AST39-40
• 3.3 葛仙米对DENA处理小鼠血清AFP蛋白含量的影响40-41
• 3.4 葛仙米对DENA处理小鼠肝脏AFP、bcl-2、p53、PTEN基因表达的影响41-44
• 3.4.1 AFP41-42
• 3.4.2 bcl-242-43
• 3.4.3 p5343-44
• 3.4.4 PTEN44
• 3.5 组织病理学结果44-46
• 第四章 讨论46-50
• 4.1 葛仙米对小鼠生长的影响46
• 4.2 葛仙米对DENA处理小鼠肝功能的影响46-47
• 4.3 葛仙米对DENA处理的小鼠AFP含量及其基因表达的影响47
• 4.4 葛仙米对DENA处理小鼠肝脏bcl-2 基因表达的影响47
• 4.5 葛仙米对DENA处理小鼠肝脏p53基因表达的影响47-48
• 4.6 葛仙米对DENA处理小鼠肝脏PTEN基因表达的影响48
• 4.7 葛仙米的抗氧化作用48
• 4.8 对小鼠肝脏组织病理学的影响48-50
• 第五章 结论50-51
• 参考文献51-59
• 图版A59-61
• 图版B61-63
• 图版C63-65
• 图版D65-67
• 图版E67-69
• 致谢69-70
• 攻读硕士学位期间的研究成果70-71

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