Si-RNA下调胃癌细胞中MYH-9的表达对其侵袭转移的影响
本文关键词:Si-RNA下调胃癌细胞中MYH-9的表达对其侵袭转移的影响
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【摘要】:目的:检测利用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制胃癌SGC-7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭和转移的影响,探讨在胃癌治疗中将MYH-9作为基因治疗靶点的价值。方法:利用RNAi技术将Lenti-MYH9转染到胃癌SGC-7901细胞中,Western Blotting法检测MYH-9蛋白的表达,RT-PCR法检测MYH-9 mRNA的表达;运用细胞迁移和侵袭实验检测MYH-9 si RNA下调胃癌SGC-7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭转移的影响。结果:与空白对照组及阴性对照组比较,Lenti-MYH9可以高效抑制SGC-7901细胞MYH-9基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率分别为88.9%(t=31.73,P0.001)和89.8%(t=33.21,P0.001);在蛋白质水平其表达抑制率分别为52.9%(t=11.01,P0.001)和60.1%(t=15.53,P0.001)。在迁移实验中,实验组细胞数为81.5±7.26个,显著低于阴性对照组185±7.33个(t=47.29,P0.001)和空白对照组189±3.46个(t=46.40,P0.001)。在侵袭实验中,实验组细胞数为49.5±13.8个,显著低于阴性对照组112±4.34个(t=15.53,P0.001)和空白对照组116±5.57个(t=28.12,P0.001)。结论:Lenti-MYH9转染SGC-7901胃癌细胞,可显著降低mRNA和蛋白的表达,对胃癌细胞的侵袭及迁移有明显的抑制作用MYH-9可能成为胃癌基因治疗的新靶点。
【关键词】:胃癌 MYH-9 慢病毒载体 RT-PCR Western blot
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R735.2
【目录】:
- 摘要3-4
- ABSTRACT4-7
- 中英文缩略表7-8
- 第1章 引言8-10
- 1.1 胃癌的研究现状及发病机制8
- 1.2 MYH9与胃癌的关系8-10
- 第2章 材料与方法10-21
- 2.1 材料10-11
- 2.1.1 实验细胞10
- 2.1.2 主要试剂10-11
- 2.1.3 主要仪器11
- 2.2 仪器处理及试剂配制11-12
- 2.3 实验方法12-20
- 2.3.1 细胞培养12
- 2.3.2 细胞传代12
- 2.3.3 细胞冻存12
- 2.3.4 细胞复苏12-13
- 2.3.5 细胞计数13
- 2.3.6 慢病毒载体对胃癌细胞SGC-7901 的转染13-15
- 2.3.7 RT-PCR检测m RNA15-17
- 2.3.8 慢病毒转染胃癌SGC-7901 细胞及Western blot检测17-19
- 2.3.9 Transwell实验检测Lenti-MYH9对SGC7901细胞迁移能力的影响19-20
- 2.3.10 Transwell实验检测Lenti-MYH9对SGC7901细胞侵袭能力的影响20
- 2.4 统计学方法20-21
- 第3章 实验结果21-27
- 3.1 细胞培养及最适MOI值测定21
- 3.2 RT-PCR筛选慢病毒沉默MYH-9基因结果21-23
- 3.3 MYH-9基因蛋白水平的测定23-24
- 3.4 SGC-7901细胞迁移实验24-25
- 3.5 SGC-7901细胞侵袭实验25-27
- 第4章 讨论27-29
- 第5章 结论与展望29-30
- 5.1 结论29
- 5.2 进一步工作的方向29-30
- 致谢30-31
- 参考文献31-34
- 攻读学位期间的研究成果34-35
- 综述35-40
- 参考文献38-40
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