孟鲁司特钠对雄激素抵抗前列腺癌的作用及凋亡相关蛋白的研究

发布时间：2017-09-06 12:23

  本文关键词：孟鲁司特钠对雄激素抵抗前列腺癌的作用及凋亡相关蛋白的研究

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【摘要】：研究目的：研究孟鲁司特钠水合物对人前列腺癌细胞系的增殖、形态、凋亡的影响及相关机制,为临床上雄激素抵抗性前列腺癌的治疗提供新的药物选择方法及初步的实验依据。方法：采用CCK-8法检测孟鲁司特钠对于人雄激素抵抗性前列腺癌DU145、PC3细胞系,人雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞系、人前列腺上皮RWPE-1细胞系细胞的生长抑制作用并计算其IC50值。在不同浓度的孟鲁司特钠作用细胞后,在普通光镜和透射电镜下观察细胞形态变化；利用流式细胞术检测孟鲁司特钠对前列腺癌细胞的凋亡作用,利用实时荧光定量PCR和Western blot技术对WNT5A、β-catenin、E-cadherin基因的mRNA表达和蛋白表达情况进行检测。结果：(1)CCK-8实验结果显示,孟鲁司特钠对DU145细胞的IC50约为2.7μg/ml,PC3细胞的IC50约为3μg/ml,对LNCaP细胞的IC50约为7μg/ml,对RWPE-1细胞的IC50约为5 μg/ml。(2)孟鲁司特钠作用前列腺癌细胞后,在普通光镜下观察,空白组的前列腺癌细胞体积较大,核大类圆形,可见明显核仁,细胞间连接紧密；药物干扰组的细胞皱缩、变圆、脱落。在透射电镜下观察,药物干预组的PC3、DU145、LNCaP细胞核固缩、染色质团块状、边集明显,核膜溶解,部分细胞内可见典型的凋亡小体。(3)流式细胞术实验结果显示,孟鲁司特钠作用后的DU145.PC3和LNCaP细胞的凋亡率均随着药物的浓度增高升高,并与药物作用时间增加呈正比。其中,对DU145、PC3细胞的影响较LNCaP细胞更强。(4)实时荧光定量PCR结果显示,对比空白组,48小时后的用药组中,E-cadherin基因在DU145、PC3和LNCaP细胞中的表达均为上调,差异有统计学意义(p0.05)。WNT5A基因在DU145细胞中的表达为上调,差异有统计学意义(p0.01),而在PC3与LNCaP细胞中的表达均为下调(p0.05)。 β-catenin基因在DU145细胞的表达与空白组相比,3μg/ml组有差异(p0.01)；在PC3与LNCaP细胞中的表达均为上调,差异有统计学意义(p0.05)。(5) Western blot结果显示,用药48小时后,在PC3细胞中,3ug/ml组的E-cadherin蛋白的表达有统计学差异(p0.05)E-cadherin蛋白在DU145、 LNCaP细胞中的表达无统计学差异。β-catenin蛋白在DU145、LNCaP细胞中的表达,空白组与3ug/ml组相比有统计学差异(p0.01)。WNT5A蛋白在DU145细胞的1.5ug/ml组表达上调,对比于空白组差异有统计学意义(p0.05)；在PC3细胞的1.5ug/ml组、3ug/ml组表达下调,相对于空白组有统计学差异(p0.01)；在LNCaP细胞的1.5ug/ml组中相对于空白组表达下调,差异有统计学意义(p0.05)结论：孟鲁司特钠对前列腺癌细胞生长有抑制作用,促使前列腺癌细胞发生凋亡。孟鲁司特钠对雄激素抵抗性前列腺癌DU145、PC3细胞的作用较人雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞更明显,可能通过干扰Wnt/β-catenin通路的信号传递,调控相关基因与蛋白的表达。
【关键词】：前列腺癌 孟鲁司特钠 细胞增殖 细胞凋亡 Wnt/β-catenin
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 个人简历3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-20
• 参考文献16-20
• 第一部分 孟鲁司特钠对人前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞增殖的影响20-27
• 1. 材料与方法20-22
• 2. 结果22-24
• 3. 讨论24-25
• 4. 小结25
• 参考文献25-27
• 第二部分 孟鲁司特钠对人前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞形态的影响27-37
• 1. 材料与方法27-29
• 2. 结果29-34
• 3. 讨论34-35
• 4. 小结35-36
• 参考文献36-37
• 第三部分 孟鲁司特钠对前列腺癌细胞凋亡的影响37-45
• 1 材料与方法37-39
• 2. 结果39-42
• 3. 讨论42-43
• 4. 小结43
• 参考文献43-45
• 第四部分 孟鲁司特钠对前列腺癌细胞相关基因及蛋白表达的影响45-60
• 1. 材料与方法45-52
• 2. 结果52-54
• 3. 讨论54-56
• 4. 小结56
• 参考文献56-60
• 缩略词简表60-62
• 综述62-76
• 一. 前列腺癌的研究现状62-64
• 二. 虚拟筛选技术与生物信息数据库建设的进展64-65
• 三. 孟鲁司特钠的研究进展65
• 四. 前列腺癌与E-cadherin,WNT5A,β-catenin蛋白的关系研究进展65-69
• 参考文献69-76
• 致谢76-77
• 攻读学位期间发表的学术论文及成果77

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本文编号：803111