放射治疗联合常山酮对荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞的影响

发布时间：2017-09-06 16:30

  本文关键词：放射治疗联合常山酮对荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞的影响

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【摘要】：目的:研究放射治疗联合常山酮对荷瘤小鼠肿瘤微环境内的肿瘤相关巨噬细胞及脾脏的肿瘤相关巨噬细胞的影响,并以此为基础探究放射治疗对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:建立肺癌移植瘤动物模型,计数状态良好的Lewis肺癌细胞2×10^6个/只接种于SPF条件下饲养的健康雌性C57BL/6J小鼠右后肢胫腓骨处皮下,待移植瘤直径达到5mm时(约在接种6天后)进行局部放射治疗及用药处理;荷瘤小鼠的处理,挑选25只肿瘤负荷相近的荷瘤小鼠随机分组,分别为空白对照组(NC)、单纯常山酮组(HF)、单纯放射治疗组(RT)、放疗联合常山酮组(RT+HF)、放疗联合TGF-beta抑制剂SB431542组(RT+SB)等五组,每组5只小鼠。对照组不做治疗,单纯常山酮组及放疗联合常山酮组于接种后第6天至2周予以2ug/0.1ml/d常山酮腹腔注射给药,放疗联合TGF-β抑制剂组于相同时间予以腹腔注射终浓度为1uM的SB,剂量为0.1ml/d/只,两个联合组与单纯放疗组的放射治疗处理为给药后两天均给予移植瘤局部10Gy×2的6MV-X线放疗,并于给药2周后处死小鼠;实验检测,制备小鼠移植瘤及脾脏的单细胞悬液进行流式细胞术检测移植瘤局部及脾脏的肿瘤相关巨噬细胞的亚型表达情况及比例,冰冻切片进行免疫荧光法检测移植瘤局部及脾脏肿瘤相关巨噬细胞各个亚型的功能表达情况。结果:在小鼠移植瘤中,肿瘤相关巨噬细胞各亚型表型的表达情况为,NC组M1型巨噬细胞比例较常山酮组显著减少,M2型巨噬细胞比例无显著变化,NC组M1/M2比例显著低于常山酮组;空白对照组的M1、M2及M1/M2比例较RT组无显著变化,但放射治疗组M1比例有下降趋势,M2比例有升高趋势;RT+HF组较NC组及HF组M1、M2及M1/M2比例均无显著变化,但与RT组相比,RT+HF组M1比例有升高趋势、M2比例有下降趋势,M1/M2比例呈升高趋势;HF组M1及M1/M2均比例显著高于NC及RT组,M2比例无显著差异;RT+SB M2比例较RT及RT+HF组有增加的趋势,M1/M2比例显著低于HF组(p=0.01)。以上结果表明,在荷瘤小鼠的肿瘤局部微环境内,应用HF可以显著改变肿瘤相关巨噬细胞的极化方向,使之朝向抗肿瘤的M1型方向分化,单纯RT则有使M1/M2下降的趋势,即朝向免疫抑制的M2方向分化的趋势,RT联合HF相对于单纯应用HF会使肿瘤相关巨噬细胞向免疫抑制方向分化的趋势,但相对于RT,仍有向抑制肿瘤的M2型分化的趋势。而RT联合SB时,相对于HF组则显著使肿瘤相关巨噬细胞向促肿瘤方向的M2分化。免疫荧光结果显示在移植瘤局部,肿瘤相关巨噬细胞的功能表达情况为,RT组较NC组,M1型巨噬细胞的功能标志物iNOS减少,M2型巨噬细胞的功能标志物Arg-1增加,提示M1/M2下降的趋势;RT+HF组较RT、HF组,iNOS升高,Arg-1减少,提示肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤的M1方向分化。在荷瘤小鼠脾脏中,肿瘤相关巨噬细胞各亚型表型的表达情况为,M1、M2比例在各组均无显著差别,HF组M1/M2比例显著高于RT+SB组。放疗组与NC及HF组相比,M2有下降趋势。放疗联合常山酮组、放疗联合抑制剂组与放疗组和常山酮组相比,M1/M2比例均有升高趋势,提示放疗联合HF或SB431542可使肿瘤相关巨噬细胞向抑肿瘤的M1亚型分化。肿瘤相关巨噬细胞各亚型的功能在脾脏情况为,RT、RT+HF、RT+SB三组的M1型巨噬细胞标志物iNOS表达较NC、HF两组增加,M2巨噬细胞功能标记物Arg-1在RT+HF、RT+SB两组呈下降趋势。以上表明在放疗联合用药后,肿瘤相关巨噬细胞的功能表达呈向M1型抗肿瘤方向分化。结论:放疗会显著抑制肿瘤局部的肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤的M1型巨噬细胞分化,肿瘤相关巨噬细胞使局部肿瘤微环境的呈免疫抑制状态。放疗联合常山酮后可抑制放疗导致的促肿瘤形成的M2型巨噬细胞的表达及功能。放疗联合TGF-β抑制剂SB并未改善局部肿瘤相关巨噬细胞的免疫抑制状态。放疗对脾脏肿瘤相关巨噬细胞影响较小,但在联合HF或SB后,可以促进肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤的M1型表达。
【关键词】：放射治疗 肿瘤相关巨噬细胞 常山酮 免疫微环境 转化生长因子β
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-13
• 前言13-17
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 对象和方法17-24
• 1.1 实验材料17-18
• 1.1.1 实验动物与细胞17
• 1.1.2 试剂17
• 1.1.3 耗材17-18
• 1.1.4 仪器设备18
• 1.2 实验方法18-24
• 1.2.1 实验试剂配制18-19
• 1.2.2 细胞培养19-20
• 1.2.3 建立肺癌移植瘤模型20-21
• 1.2.4 实验分组及处理21
• 1.2.5 移植瘤微环境及脾脏单个细胞的制备21-22
• 1.2.6 移植瘤微环境及脾脏肿瘤相关巨噬细胞表型鉴定22
• 1.2.7 移植瘤微环境及脾脏肿瘤相关巨噬细胞功能鉴定22-23
• 1.2.8 统计学分析23-24
• 结果24-32
• 2.1 流式细胞术检测小鼠移植瘤组织中TAMs亚型表达24-26
• 2.2 流式细胞术检测小鼠脾脏中TAMs亚型表达26-27
• 2.3 冰冻切片免疫荧光检测小鼠移植瘤组织中TAMs功能表达27-29
• 2.4 冰冻切片免疫荧光检测小鼠脾脏组织中TAMs功能表达29-32
• 讨论32-38
• 3.1 放射治疗对免疫功能的积极调节作用32-33
• 3.2 放射治疗与肿瘤的复发、侵袭与转移33-34
• 3.3 肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤的发生发展34-35
• 3.4 放射治疗与肿瘤相关巨噬细胞35-36
• 3.5 常山酮与肿瘤的发生发展36-38
• 结论38-39
• 参考文献39-50
• 发表论文和参加科研情况说明50-51
• 综述 放射治疗与肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤治疗中的研究进展51-68
• 综述参考文献58-68
• 致谢68-69
• 个人简历69

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本文编号：804216