单药CHK1抑制剂通过提高复制压力靶向治疗放疗不敏感乳腺癌细胞

发布时间：2017-09-06 13:19

  本文关键词：单药CHK1抑制剂通过提高复制压力靶向治疗放疗不敏感乳腺癌细胞

  更多相关文章： DNA双链损伤 乳腺癌 复制压力 CHK1抑制剂 放疗不敏感

【摘要】：目的:本实验目的是为放疗不敏感乳腺癌细胞(RBCC)寻找更合适的靶向治疗药物。方法:采用生物医学常用蛋白质印记、克隆形成、免疫荧光、流式细胞检测、彗星实验、DNA纤维实验以及动物实验模型,进行比较对照细胞及其经过长期离子射线照射之后形成的放疗不敏感乳腺癌细胞中DNA损伤应答的改变,进而观察CHK1抑制剂在联合放疗后或仅仅单药处理之后对细胞造成的不同影响。结果:DNA损伤修复蛋白ATR/CHK1/BRCA1/Ct IP在放疗不敏感乳腺癌细胞中出现高表达,并且在放疗不敏感乳腺癌细胞中同源重组(HR)的细胞修复机制被激活。虽然CHK1抑制剂AZD7762限制了同源重组的活性,但其并没有使放疗不敏感乳腺癌细胞恢复对放疗的敏感性。然而,在体内和体外试验中我们却发现AZD7762单药竟然明显的抑制了放疗不敏感乳腺癌细胞的生长。因此我们提出假说:CHK1抑制剂可以通过释放原本被抑制的癌基因诱导的复制压力,进而特异性的杀死放疗不敏感乳腺癌细胞。我们发现相比对照组细胞,在放疗不敏感乳腺癌细胞中癌基因c-Myc/CDC25A/c-Src/H-ras/E2F1出现高表达的状态。同样,相比对照组细胞在放疗不敏感乳腺癌细胞中经过AZD7762处理之后DNA损伤明显增多,并且增加了复制起始点,从而消耗脱氧核苷酸而导致复制进行速度减慢,最终导致细胞死亡。结论:虽然在放疗不敏感乳腺癌细胞中激活了癌基因通路,使得该细胞中复制压力出现明显增高,但其却通过依赖CHK1信号转导而维持正常存活。因此,我们的研究通过使用CHK1抑制剂释放上调的复制压力,使细胞累积过多损伤的DNA无法正常修复进而特异性的杀死放疗不敏感乳腺癌细胞。在今后临床治疗中出现的乳腺癌放疗不敏感的问题,提示使用CHK1作为其靶向治疗药物的可能性。
【关键词】：DNA双链损伤 乳腺癌 复制压力 CHK1抑制剂 放疗不敏感
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-16
• 1.1 细胞系和细胞培养11
• 1.2 蛋白质印记（Western Blot）11-12
• 1.3 免疫荧光分析（Immunofluorescence analysis）12-13
• 1.4 转染以及感染13
• 1.5 同源重组分析13
• 1.6 细胞周期分析13-14
• 1.7 实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(qRT-PCR)14
• 1.8 彗星实验（Comet assay）14
• 1.9 克隆形成实验（Colony formation assays）14-15
• 1.10 DNA纤维测定实验（DNA Fiber assay）15
• 1.11 LC--MS/MS的方法定量测定细胞裂解液中ATP和dATP15
• 1.12 异种移植模型（Xenograft studies）15-16
• 2 结果16-25
• 2.1 单药 CHK1 抑制剂可以明显抑制放疗不敏感乳腺癌细胞的生长但却不能恢复其放疗的敏感16-17
• 2.2 乳腺癌放疗不敏感细胞中表现出癌基因的高表达和高水平的复制压力17-19
• 2.3 在放疗不敏感乳腺癌细胞中CHK1抑制剂上调复制压力表现明显19-20
• 2.4 在放疗不敏感乳腺癌细胞 MCF7/C6 中 CHK1 抑制剂导致复制起始点明显增多20-22
• 2.5 在放疗不敏感乳腺癌细胞中 CHK1 抑制剂导致了复制叉速度进展的明显减慢和脱氧核苷酸的供应不足22-23
• 2.6 CHK1抑制剂明显降低了放疗不敏感乳腺癌细胞同源重组的能力23-25
• 3 讨论25-27
• 4 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-45
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 在学期间研究成果46-47
• 个人简历47

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1 黄啸原;用“印度阅兵”形容乳腺癌合适吗?[J];诊断病理学杂志;2001年02期

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4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

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7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

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1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

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1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

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1 柴红燕;疾病状态下CYP4Z1和4A的生物学行为及其药物干预研究[D];武汉大学;2012年

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本文编号：803349