GP73对肝细胞肝癌细胞系增殖和转移的机制研究

发布时间：2017-09-06 21:48

  本文关键词：GP73对肝细胞肝癌细胞系增殖和转移的机制研究

  更多相关文章： 高尔基体磷酸化蛋白2 肝细胞肝癌 小干扰RNA 细胞增殖与转移 肿瘤标志物

【摘要】：目的高尔基体磷酸化蛋白2 (GOLPH2/GP73)是一种在肝癌细胞中高表达的高尔基体膜蛋白,作为一种精准的肿瘤标志物,被用于指示肝肿瘤的发病进程。虽已有报道指出GP73和肝癌增殖有相关性,但具体机制仍不清楚。本研究拟阐述GP73参与的肝细胞肝癌增殖及迁移和侵袭过程的具体调控机制。方法1.利用GP73特异性siRNA沉默HepG2、SMMC-7721以及Huh7细胞系的GP73基因表达。2.采用MTS、软琼脂克隆实验对三种肝细胞肿瘤细胞系增殖水平进行检测,并通过移植瘤抑制实验进一步在体内证明干扰GP73对肿瘤增殖的影响。3.通过免疫印迹测定增殖和细胞周期信号相关通路蛋白,并使用流式细胞术测定细胞周期。4.通过Transwell迁移和侵袭实验、细胞免疫荧光和免疫印迹测定GP73对肿瘤迁移和侵袭的影响以及对N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白表达的影响。结果1.干扰GP73会降低肝细胞肝癌细胞体外和体内增殖。2.干扰GP73会降低肝细胞肝癌细胞中p-Rb表达量。3.干扰GP73对肝细胞肝癌细胞的细胞周期无影响。4.干扰GP73会降低肿瘤迁移和侵袭能力,并上调N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白的表达量。结论GP73可通过调控p-Rb、N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白的表达量,促进肝细胞肝癌细胞迁移和侵袭,从而进一步影响细胞增殖。
【关键词】：高尔基体磷酸化蛋白2 肝细胞肝癌 小干扰RNA 细胞增殖与转移 肿瘤标志物
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文缩略词9-15
• 第1章 引言15-19
• 1.1 研究背景15-17
• 1.2 研究目标17
• 1.3 主要研究内容17-19
• 第2章 材料与方法19-34
• 2.1 实验材料19-22
• 2.2 实验方法22-34
• 第3章 实验结果34-53
• 3.1 GP73在肝癌细胞中的表达量以及干扰效率的验证34-36
• 3.1.1 GP73在肝癌细胞中呈高表达34-35
• 3.1.2 GP73特异性siRNA对细胞内GP73转录和蛋白表达水平的抑制35-36
• 3.2 干扰GP73抑制细胞体外增殖36-39
• 3.2.1 MTS实验结果表明干扰GP73抑制细胞体外增殖36-37
• 3.2.2 软琼脂克隆形成实验结果表明干扰GP73抑制细胞体外增殖37-39
• 3.3 干扰GP73抑制肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤增殖39-43
• 3.3.1 免疫组化结果表明化学修饰siRNA对裸鼠体内移植瘤中GP73表达产生抑制作用39-40
• 3.3.2 活体干扰裸鼠皮下移植瘤实验结果表明干扰GP73抑制肝癌细胞皮下移植瘤增殖40-41
• 3.3.3 相关形态学和免疫学指标测定41-43
• 3.4 GP73对增殖相关信号通路和细胞周期的影响43-46
• 3.4.1 干扰GP73下调p-Rb的表达量43-44
• 3.4.2 干扰GP73对细胞周期分布无明显影响44-46
• 3.5 干扰GP73抑制肿瘤迁移和侵袭并改变EMT相关分子表达46-52
• 3.5.1 Transwell实验表明干扰GP73抑制细胞体外迁移和侵袭46-48
• 3.5.2 干扰GP73上调N-cadherin和E-cadherin的表达量48-52
• 3.6 结论52-53
• 第4章 讨论53-57
• 4.1 GP73对细胞增殖和转移的影响53-55
• 4.2 展望55-57
• 参考文献57-60
• 文献综述60-74
• 参考文献71-74
• 作者简介及攻读硕士学位期间主要研究成果74

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱立新,耿小平;肝细胞肝癌术后复发的危险因素、预防及治疗[J];肝胆外科杂志;2000年06期

2 季伟,王慧芬;乙型肝炎病毒感染合并肝细胞肝癌153例临床分析[J];中华肝脏病杂志;2001年06期

3 陈孝平;张志伟;杨甲梅;沈锋;;肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J];中华普通外科学文献(电子版);2008年06期

4 董硕;谢广茹;吴雄志;;男性肝细胞肝癌术后预后因素分析[J];中国肿瘤临床;2008年08期

5 陈孝平;张志伟;杨甲梅;沈锋;;肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J];中华普通外科学文献(电子版);2009年02期

6 郭洪生;杜智;高英堂;薛春祥;张勤;朱争艳;王伟丽;;磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝细胞肝癌中的表达及意义[J];中国肿瘤临床;2009年08期

7 陈孝平;张志伟;杨甲梅;沈锋;;肝细胞肝癌外科治疗方法的选择[J];中华普通外科学文献(电子版);2010年01期

8 徐霁;;多齿针大剂量乙醇消融治疗直径5.0cm以内的肝细胞肝癌[J];国际医学放射学杂志;2010年01期

9 张国强;杨定华;李相z，

本文编号：805651