MUC1对人结肠癌细胞HCT116生物学行为的影响

发布时间：2017-09-07 04:10

  本文关键词：MUC1对人结肠癌细胞HCT116生物学行为的影响

  更多相关文章： MUC1 结肠癌 增殖 侵袭 化疗敏感性

【摘要】：目的：本课题采用MUC1表达阴性的结肠癌细胞株HCT116,通过慢病毒转染,获得稳定表达MUC1的HCT116细胞株,观察MUC1对细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响,为以MUC1为靶点的结肠癌治疗提供实验室依据。方法：1.构建稳定表达MUC1的HCT116细胞株：(1)MUC1慢病毒载体的构建：通过Genebank查询人MUC1基因,选取恰当的质粒,PCR扩增目的基因,将目的基因与慢病毒质粒双酶切后构建重组质粒并鉴定,之后转染293T细胞进行慢病毒包装,并测定病毒滴度。(2)慢病毒转染HCT116细胞,嘌呤霉素筛选稳定细胞株。(3)采用半定量RT-PCR、Western Blot进行MUC1表达的鉴定。2.MUC1对肿瘤细胞生物学行为的影响：(1)实验分组：MUC1病毒组和空病毒组。(2)CCK实验和软琼脂克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力。(3) Trans well侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力。3.MUC1对奥沙利铂敏感性的影响：MTT实验检测两组细胞对奥沙利铂的敏感性,流式细胞仪检测奥沙铂处理后两组细胞凋亡率,酶底物法检测奥沙利铂处理后两组细胞Caspas e-3活性水平。结果：1.获得稳定表达MUC1的HCT116细胞株。2.两组细胞贴壁生长无差异。MUC1病毒组细胞软克隆形成数与空病毒组相比有明显差异[(26.0±2.31)vs(5.67±1.45) (P0.05)]。3.MUC1病毒组穿过小室纤维素膜的细胞数与空病毒组相比有明显差异[(27.3±4.41)vs(81.0±8.14) (P0.05)]。4.两组细胞奥沙利铂作用24h后IC50分别为：空病毒组ICso(14.27±0.25) ug/mL, MUC1病毒组IC50(26.03±0.20) ug/mL。奥沙利铂(5ug/mL)处理细胞36h后,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡,凋亡率分别为(26.6±1.22),(18.5±1.44)(P0.05)；奥沙利铂(5ug/mL)处理细胞36h后,酶底物反应法检测两组细胞Caspase-3活性,两组细胞Caspase-3(U)分别为：(16.56±0.73),(7.110±0.49)(P0.05)。结论：转染MUC1后细胞的软琼脂克隆形成能力明显增高、侵袭能力增强以及对奥沙利铂的化疗敏感性降低。初步探讨MUC1耐药机制发现可能与Caspase-3活性相关。
【关键词】：MUC1 结肠癌 增殖 侵袭 化疗敏感性
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-21
• 2 结果21-27
• 3 讨论27-30
• 全文结论30-31
• 参考文献31-33
• 文献综述33-46
• 参考文献41-46
• 致谢46-47
• 硕士期间发表的论文47

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘曼;余远林;高雪;施明;王欢;余宏;;反义角蛋白13慢病毒质粒对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响[J];中国耳鼻咽喉颅底外科杂志;2014年02期

2 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 易守会;MUC1对人结肠癌细胞HCT116生物学行为的影响[D];重庆医科大学;2015年

，

本文编号：807321