磷酸鞘氨醇通路及相关抑制剂对胰腺癌恶性生物学行为的影响机制研究

发布时间：2017-09-09 10:10

  本文关键词：磷酸鞘氨醇通路及相关抑制剂对胰腺癌恶性生物学行为的影响机制研究

  更多相关文章： S1P 胰腺癌 ABL2 N-Cadherin nilotinib 迁移侵袭

【摘要】：研究目的:磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)通路作为调控肿瘤恶性行为机制的重要组成部分,其对胰腺癌侵袭转移能力的影响尚不清楚。作为重要的促肿瘤发展因子,N-Cadherin、ABL2的表达活化机制和S1P关系仍有待研究。作为在白血病中应用的重要的靶向治疗药物,ABL2激酶抑制剂尼洛替尼(nilotinib)对胰腺癌细胞株的增殖、迁移侵袭能力的影响也是我们研究的重要方向。研究方法:体外培养人胰腺癌细胞株,采用S1P作用于胰腺癌PANC-1细胞后,采用划痕实验和transwell实验对细胞的迁移侵袭能力进行观察,进一步检测迁移侵袭关键分子ABL2和N-Cadherin的mRNA和蛋白的表达情况,然后通过VPC23019阻滞S1P受体S1PR1/3进而对下游分子表达的改变进行检测。同时我们应用ABL2激酶的抑制剂nilotinib作用于胰腺癌细胞株,并对细胞株的凋亡形态进行了观察,并应用CCK-8和流式细胞技术对尼洛替尼的细胞毒性进行检测,再通过联合S1P刺激后对细胞迁移能力、以及关键分子ABL2和N-Cadherin的表达情况进行进一步的对比研究。研究结果:S1P作用于PANC-1细胞后,划痕实验和Transwell显示S1P刺激后PANC-1迁移距离和穿膜细胞数均增加(P均0.05),随着刺激浓度的升高,ABL2的mRNA表达量与S1P浓度成正相关趋势,N-Cadherin的mRNA表达量变化呈钟型曲线变化,采用100nmol/L的S1P刺激时,ABL2和N-Cadherin的表达同时升高(P均0.05)。应用VPC23019对PANC-1进行阻滞后,ABL2、N-Cadherin的mRNA和蛋白表达均出现下降趋势(P均0.05),VPC23019的应用可以显著抑制迁移侵袭能力;ABL2激酶抑制剂nilotinib的刺激浓度和胰腺癌细胞株凋亡率成正相关,并可以有效抑制S1P诱导增强的迁移能力,同时也降低了N-Cadherin的蛋白表达。结论:1、S1P可以提高PANC-1迁移侵袭能力,明显增强PANC-1的N-Cadherin和ABL2的表达,而该作用可以被特异的S1PR1/3受体抑制剂VPC23019予以阻滞。2、ABL2激酶抑制剂nilotinib可以有效诱导细胞凋亡,抑制S1P诱导增强的PANC-1迁移能力和N-Cadherin高表达情况,ABL2可能为N-Cadherin的上游调节基因,该作用可能和S1P信号通路的调控有关。
【关键词】：S1P 胰腺癌 ABL2 N-Cadherin nilotinib 迁移侵袭
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-17
• 一、胰腺癌细胞株11
• 二、实验设备与仪器11-13
• 三、部分试剂的配制13-14
• 四、实验方法14-17
• 实验结果17-24
• 一、S1P通路及相关受体抑制剂对PANC-1细胞迁移侵袭能力及相关分子影响17-20
• 二、nilotinib对PANC-1细胞恶性生物学行为及相关蛋白分子影响20-24
• 讨论24-29
• 结论29-30
• 全文总结30-32
• 一、主要研究结果30
• 二、创新性30
• 三、实验不足之处及改进方向30-32
• 参考文献32-37
• 综述 S1P通路及其与肿瘤恶性生物学行为相关的研究进展37-51
• 参考文献44-51
• 攻读硕士期间文章51-52
• 致谢52

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本文编号：819819