PRMT2过表达对乳腺癌细胞增殖的影响

发布时间：2017-09-10 00:29

  本文关键词：PRMT2过表达对乳腺癌细胞增殖的影响

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【摘要】：目的:探讨蛋白精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)过表达对乳腺癌MCF7及MDA-MB-231细胞增殖的影响,并初步探讨其调控细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)的分子机制。方法:将真核表达载体pc DNA3.1/pc DNA3.1-PRMT2瞬时转染至MDA-MB-231细胞,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测CCND1蛋白的表达;构建PRMT2慢病毒载体,并在293T细胞内进行包装及病毒滴度测定后检测其表达能力;建立MCF7及MDA-MB-231稳定细胞株,显微镜观察四环素诱导前后细胞的变化,并通过MTT及克隆形成实验检测PRMT2过表达对乳腺癌细胞增殖的影响;Western Blot检测通路相关蛋白的表达,初步探讨PRMT2过表达影响乳腺癌细胞增殖的分子机制。结果:1.Western Blot结果显示PRMT2瞬时过表达明显下调CCND1的表达(p0.05);2.成功构建了PRMT2 Tet-on慢病毒表达载体经测序及鉴定与基因序列完全一致,293T细胞内包装后获得病毒滴度为2.0×108 TU/ml,经四环素诱导后Western Blot检测到PRMT2-3Flag蛋白的表达;3.成功建立MCF7-PRMT2及MDA-MB-231-PRMT2稳定细胞株,经四环素诱导后Western Blot分别检测到PRMT2-3Flag蛋白的表达;4.MTT检测显示:四环素诱导组乳腺癌细胞增殖趋势明显减慢(p0.05);5.克隆形成实验显示:四环素诱导组乳腺癌细胞增殖能力明显降低(p0.05);6.Western Blot检测显示:PRMT2蛋白表达上调后p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白表达减少。结论:1.PRMT2过表达后抑制乳腺癌细胞的增殖。2.PRMT2抑制乳腺癌细胞增殖的机制可能与其调控p-Akt、p-GSK-3β及CCND1的表达相关。
【关键词】：蛋白精氨酸甲基转移酶2(PRMT2) 人乳腺癌细胞 增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略词表11-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 实验材料14-19
• 2.1 质粒、载体、细菌和细胞株14
• 2.2 培养基与血清14
• 2.3 主要药品和试剂14-15
• 2.4 主要试剂配置15-17
• 2.5 主要仪器和设备17-19
• 第3章 实验方法19-29
• 3.1 细胞培养及处理19-20
• 3.2 Western Blot检测相关蛋白的表达20-22
• 3.3 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）22
• 3.4 PRMT2慢病毒载体构建22-25
• 3.5 慢病毒包装及滴度测定25-26
• 3.6 慢病毒感染 293T细胞26-27
• 3.7 293T细胞内目的蛋白表达的检测27
• 3.8 MCF7、MDA-MB-231单克隆稳定细胞株的建立与鉴定27
• 3.9 MTT(黄色噻唑兰)实验27-28
• 3.10 细胞克隆形成实验28
• 3.11 数据分析28-29
• 第4章 实验结果29-36
• 4.1 PRMT2瞬时过表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖29
• 4.2 PRMT2慢病毒载体构建及鉴定29-30
• 4.3 PRMT2慢病毒载体的包装及病毒滴度测定30-31
• 4.4 PRMT2慢病毒载体能在293T细胞内表达31-32
• 4.5 MCF7、MDA-MB-231单克隆稳定细胞株的建立与鉴定----244.6 MTT检测结果32-33
• 4.6 MTT 实验33-34
• 4.7 克隆形成实验结果34-35
• 4.8 PRMT2过表达对相关蛋白表达的影响35-36
• 第5章 讨论36-39
• 第6章 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-53
• 参考文献49-53
• 硕士期间发表的论文53-54
• 致谢54-55

【参考文献】

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1 王焕春;张海静;胡成进;;MiRNA在乳腺癌转移中的作用[J];生命的化学;2012年03期

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本文编号：823664