TFAP2α在肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖和周期的影响

发布时间：2017-09-10 04:49

  本文关键词：TFAP2α在肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖和周期的影响

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【摘要】：背景：肾透明细胞癌临床常见,恶性度较高,尤其是晚期转移性患者,外科手术、放疗、化疗均不敏感,成为治疗的难点。肾透明细胞癌中存在很多基因突变,近年来寻找切实有效的分子靶点,开展分子靶向治疗及早期诊断显示出更大的临床优势。TFAP2α是一种转录因子,在很多肿瘤类型中表达异常,被认为与肿瘤发生发展机制有着密切关系。但Tl AP2α在肾透明细胞癌中的研究报道很少见到。目的：本实验旨在研究TFAP2α在人肾透明细胞癌细胞、组织中的表达,探讨肿瘤组织中TFAP2α水平与临床资料的相关性;并在肾透明细胞癌细胞系中,通过下调或上调TFAP2α的表达,检测其对肿瘤细胞增殖及细胞周期的影响,从而探索TFAP2α在肾透明细胞癌发生发展过程中的生物学意义。方法：1.PCR及Western-blot检测肾透明细胞癌细胞系(769-P、Caki-2、786-O、Caki-1、ACHN、A498、SN12-PM6)与正常肾小管上皮细胞系(HKC、HK2)中TFAP2α的表达水平差异;免疫组织化学方法检测12例肾透明细胞癌肿瘤组织及对应瘤旁组织中TFAP2α表达,PCR法检测49例肾透明细胞癌肿瘤组织和相应瘤旁组织中TFAP2α表达水平差异,并分析与临床资料的相关性。2.运用RNA干扰技术,在肾透明细胞癌细胞系786-O中,转染siRNA下调TFAP2α的表达，检测786-O细胞增殖及细胞周期的变化。3.构建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α质粒,上调TFAP2α在肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2的表达,检测786-O、Caki-2细胞增殖及细胞周期的变化。结果：1.在细胞系中,肾透明细胞癌较正常肾小管上皮细胞中TFAP2α的mRNA水平、蛋白水平均显著降低(P0.05)。在组织中,免疫组化显示TFAP2α在胞核及胞质均有表达，以胞核为主：肿瘤组织中弱表达,对应瘤旁组织中表达相对较强;肿瘤组织mRNA平均表达显著低于瘤旁组织(P0.05);TFAP2α的mRNA水平在不同性别、年龄、BMI指数、及T分期等组间的表达均无统计学意义(PO.05),但与肾透明细胞癌Fuhrman分级呈负相关(P0.05),Fuhrman分级越高,TFAP2α表达水平越低。2.成功转染siRNA-TFAP2α下调肾透明细胞癌TFAP2α表达,MTS及平板克隆实验显示下调TFAP2a后细胞增殖率明显增高(P0.05),流式细胞术显示siRNA组G0/G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高(P0.05),而G2/M期比例无显著差异(P0.05),细胞快速进入S期而促进细胞增殖。3.成功构建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α质粒上调肾透明细胞癌TFAP2 α表达，MTS及平板克隆实验显示上调TFAP2a后细胞增殖率明显降低(P0.05),流式细胞术显示质粒组G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例均显著降低(P0.05),而G2/M期比例无显著差异(P0.05),阻滞于G1/S期而抑制细胞增殖。结论：TFAP2α在肾透明细胞癌中异常低表达,与其恶性分化程度存在相关性;TFAP2α影响癌细胞增殖及细胞周期变化,提示可能在肾透明细胞癌的发生发展中发挥抑癌基因作用。
【关键词】：TFAP2α 肾透明细胞癌 细胞增殖 细胞周期
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 TFAP2α在肾透明细胞癌细胞系和组织中的表达11-19
• 1. 材料与方法11-15
• 2. 结果15-18
• 3. 小结18-19
• 第二部分 siRNA下调TFAP2α表达对肾透明细胞癌细胞系增殖能力的影响19-24
• 1. 材料与方法19-21
• 2. 结果21-23
• 3. 小结23-24
• 第三部分 构建质粒上调TFAP2α表达及对肾透明细胞癌细胞系增殖能力的影响24-32
• 1. 材料与方法24-28
• 2. 结果28-31
• 3. 小结31-32
• 讨论及结论32-34
• 参考文献34-37
• 文献综述37-46
• 参考文献42-46
• 英文略缩词表46-47
• 攻读学位期间发表论文47-48
• 致谢48

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本文编号：824840