酒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程中自噬的研究

发布时间：2017-09-10 18:13

  本文关键词：酒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程中自噬的研究

  更多相关文章： 自噬 酒精 LC3 p62 SMMC-7721

【摘要】：目的:使用不同浓度的酒精作用于人肝癌细胞SMMC-7721,观察细胞凋亡过程中自噬的发生。方法:四甲偶氮唑盐比色法(MTT)检测酒精对SMMC-7721细胞生存率的影响;DAPI染色观察细胞凋亡;间接免疫荧光法观察细胞自噬标志物LC3与p62表达变化;透射电镜观察细胞中自噬体的超微结构;蛋白免疫印迹法(Western-Blot)定量检测LC3与p62蛋白量表达。结果:酒精浓度分别为100 mmol/L、200 mmol/L、400 mmol/L和800 mmol/L,处理SMMC-7721细胞24h,与0 mmol/L酒精浓度组比较,细胞生存率分别为76.35%(P0.05)、56.25%(P0.01)、45.22%(P0.01)和38.42%(P0.01),酒精可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,生存率呈浓度依赖性。DAPI染细胞核,随酒精浓度增加可见典型细胞凋亡特征性变化,凋亡率较对照组有显著差异(P0.05),酒精可显著诱导SMMC-7721细胞凋亡;间接免疫荧光观察酒精致SMMC-7721细胞自噬,自噬标志物LC3在细胞核附近密度增高,p62在细胞质中也有增加,并且可见LC3与p62点状共定位;Western-Blot结果显示,不同酒精浓度处理SMMC-7721细胞2h时,LC3-II和p62的表达量在200 mmol/L时都达到最高,较去血清对照组有统计学意义(P0.05),LC3-I表达量降低但无统计学意义(P0.05);酒精浓度200 mmol/L处理SMMC-7721细胞不同时间,LC3表达量较去血清对照组有显著增加,p62表达量在2h和6h明显增加,之后逐渐降低;使用单纯去血清培养基对照处理相同时间,LC3表达量较去血清对照组有显著增加,但趋势与含酒精组不同,p62表达量在2h和6h明显增加,但增加程度有所降低;透射电镜也观察到SMMC-7721细胞中有自噬体存在。结论:酒精显著诱导SMMC-7721细胞凋亡;酒精诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中有自噬发生。
【关键词】：自噬 酒精 LC3 p62 SMMC-7721
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-12
• 1 实验材料、试剂和仪器12-17
• 1.1 细胞株12
• 1.2 主要仪器设备12-13
• 1.3 主要试剂与实验材料13-14
• 1.4 主要试剂配制方法14-17
• 1.4.1 细胞培养基14
• 1.4.2 磷酸盐缓冲液（PBS）14
• 1.4.3 MTT工作液14
• 1.4.4 30% Acr-Bis14
• 1.4.5 分离胶缓冲液14
• 1.4.6 浓缩胶缓冲液14-15
• 1.4.7 1.0 mol/L Tris·HCl，pH 7.515
• 1.4.8 10% SDS15
• 1.4.9 2×转移电泳缓冲液15
• 1.4.10 10×电泳缓冲液15
• 1.4.11 10×TBS缓冲液15
• 1.4.12 TBST缓冲液15
• 1.4.13 Epon812树脂15-17
• 2 实验方法17-21
• 2.1 MTT法检测细胞生存率17
• 2.2 DAPI染色检测细胞凋亡17
• 2.3 间接免疫荧光检测LC3与p62的表达及定位17-18
• 2.4 透射电镜观察自噬体形态学特征18
• 2.5 Western-Blot检测LC3与p62蛋白表达量18-20
• 2.5.1 蛋白样品的制备和定量18-19
• 2.5.2 SDS-PAGE及转移电泳19-20
• 2.5.3 抗体杂交和发光检测20
• 2.6 统计学方法20-21
• 3 结果21-33
• 3.1 酒精对SMMC-7721细胞生存率的影响21-22
• 3.2 酒精诱导SMMC-7721细胞凋亡22-23
• 3.3 自噬体的超微结构23
• 3.4 间接免疫荧光法观察酒精对SMMC-7721细胞LC3的影响23-24
• 3.5 间接免疫荧光法观察酒精对SMMC-7721细胞p62的影响24
• 3.6 SMMC-7721细胞中LC3与p62的共定位24-25
• 3.7 Western-Blot法检测酒精对SMMC-7721细胞LC3的影响25-28
• 3.8 Western-Blot法检测酒精对SMMC-7721细胞p62的影响28-33
• 4 讨论33-35
• 5 结论35-37
• 参考文献37-41
• 文献综述41-67
• 参考文献55-67
• 附录A 英文缩略词表67-69
• 致谢69-71
• 攻读学位期间发表的学术论文71-72

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 金晓明,张引成,李雅馨,胡永升;阿霉素诱导细胞凋亡过程中的信号传递[J];肿瘤研究与临床;1999年05期

2 邓丽英,张云汉,张红新,马长路,陈振光;细胞凋亡过程中的形态学变化与胞质运动的观察[J];华人消化杂志;1998年S2期

3 张四洋;于淼;高建;邱雪杉;崔泽实;;Cameleon测钙系统在H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用[J];中国细胞生物学学报;2013年10期

4 刘彦信,胡欢开,郑德先;TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达[J];中国医学科学院学报;2002年03期

5 范芸,顾惜春,李蓉生,陈嘉林,刘俊达;砷剂对NB_4细胞凋亡过程的影响[J];临床血液学杂志;2002年04期

6 张引成,金晓明,刘军,李家伟;细胞凋亡过程中细胞内Ca~(2+)和蛋白激酶C浓度的改变[J];实用口腔医学杂志;2003年05期

7 王晓静;氧化应激相关的细胞凋亡过程中基因表达改变[J];国外医学(肿瘤学分册);2004年01期

8 周光飚,张广森;吲哚美辛诱导K562细胞凋亡过程中半胱天冬酶及细胞内游离钙浓度的变化[J];中华血液学杂志;2001年05期

9 肖广芬 ,卢青 ,杨向东;P73基因在长春新碱诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达[J];中国现代医学杂志;2002年05期

10 朱宏丽,汪月增,于力,李宾,姚善谦,楼方定;FAS,FASL及Bcl-2在化疗药物诱导RMA细胞凋亡过程中的表达[J];中国实验血液学杂志;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 蒲咏梅;张东才;;细胞凋亡过程中的钙信号研究[A];首届粤港生物物理学术研讨会论文集[C];1999年

2 可国安;丁若虹;刘柏林;姜自清;;瘢痕细胞凋亡过程中Ca~(2+)和三磷酸肌醇浓度的改变[A];第十一次湖北省整形外科学术会议第四次湖北省医学美容学术会议论文汇编[C];2004年

3 刘彦信;胡欢开;任韵钊;史娟;郑德先;;TRAIL诱导白血病细胞凋亡过程中基因差异表达及其功能研究[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

4 石松林;孔海燕;李祺福;王三英;路锟;;Prohibitin在人永生化表皮细胞凋亡过程中的表达及调控作用研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

5 胡欢开;刘彦信;郑德先;;TRAIL诱导白血病细胞凋亡过程中基因差异表达的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

6 蔡莉;易敬林;张旭;张学军;;H2O2诱导RPE细胞凋亡过程中乙酰胆碱酯酶的表达[A];第十一次全省中、西医眼科学术交流会学术论文集[C];2012年

7 汪献旺;邢达;;FOXO在细胞凋亡过程中的作用机制和信号通路研究[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

8 吴银院;陈同生;邢达;;实时分析UV诱导的细胞凋亡过程中Bax的转位[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年

9 张永炜;刘卫军;蒋建飞;萧东;丁健;;沙尔威辛诱导HL-60细胞凋亡过程中PP2A活化并下调端粒酶活性[A];第六届全国药理学教学学术会议论文摘要汇编[C];2003年

10 蒋宇扬;;以小分子化合物为探针研究肿瘤细胞凋亡过程中的信号传导通路[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 何德功;癫痫发作与基因变异有关[N];医药经济报;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 刘诗o，

本文编号：825849