胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞融合的鉴定及生物学特性分析

发布时间：2017-09-10 22:22

  本文关键词：胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞融合的鉴定及生物学特性分析

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【摘要】：第一部分:胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞的体外融合及鉴定目的:在人胶质瘤干细胞与间质细胞双色荧光示踪体外共培养模型中,观察胶质瘤干细胞与其微环境中骨髓源性间质细胞之间的相互作用,包括能否发生融合,并以多指标验证融合细胞的存在。方法:将红色荧光蛋白(RFP)基因稳定转染的人胶质瘤干细胞株SU4-RFP和源于绿色荧光蛋白(EGFP)Balb/c裸小鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和巨噬细胞(Mφ)分别共培养,激光共聚焦显微镜下观察SU4-RFP分别与BMSCs、Mφ间的活跃相互作用,及能否发生融合,随后采用显微虹吸法单克隆高增殖力RFP/EGFP双阳性细胞,并分别命名为胶质瘤干细胞与骨髓间充质细胞融合细胞(F-BMSCs)和胶质瘤干细胞与巨噬细胞融合细胞(F-Mφ),先以荧光标记、原位杂交技术(FISH)、Western blotting分别检测SU4-RFP、BMSCs、F-BMSCs、F-Mφ中RFP、EGFP基因和蛋白的表达;再以免疫细胞化学染色检测SU4-RFP、BMSCs、Mφ和F-BMSCs、F-Mφ细胞特异性标志物的表达;最后进行染色体核型分析SU4-RFP、BMSCs、F-BMSCs、F-Mφ有丝分裂相的染色体形态特征。结果:激光扫描共聚焦显微镜下观察体外共培养的SU4-RFP能分别与BMSCs、Mφ发生活跃相互作用,二组共培养细胞均可发生胶质瘤干细胞与BMSCs或Mφ的融合,融合细胞共表达红、绿两种荧光;FISH、Western blotting检测进一步证实F-BMSCs、F-Mφ共表达RFP、EGFP基因及相应的荧光蛋白;免疫细胞化学染色检测细胞表面标志物表达情况,显示融合前SU4-RFP细胞Nestin表达阳性,BMSCs特异性高表达其标志物CD105和CD44,Mφ细胞高表达其特异性标志物CD68。融合细胞中F-BMSCs共表达肿瘤干细胞标志物Nestin和BMSCs标志物CD105、CD44,F-Mφ共表达肿瘤干细胞标志物Nestin和Mφ标志物CD68;染色体核型分析显示F-BMSCs、F-Mφ的染色体核型中小鼠型端着丝粒染色体占优势,F-BMSCs核型中含有符合人染色体特征的中着丝粒染色体两条,F-Mφ含一条。结论:肿瘤干细胞可与微环境中骨髓源性BMSCs或Mφ发生活跃相互作用,并可自发融合。第二部分:胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞融合后生物学特性初步分析目的:研究胶质瘤干细胞与骨髓间充质干细胞或巨噬细胞融合后,融合细胞的生物学特性,并与胶质瘤干细胞作比较。方法:采用克隆形成实验、CCK-8实验、Transwell实验以及细胞凋亡实验分别检测并比较F-BMSCs、F-Mφ、SU4-RFP细胞的增殖、侵袭能力以及细胞凋亡。结果:细胞克隆形成实验显示融合细胞F-BMSCs、F-Mφ的克隆形成率高于SU4-RFP(P0.05),CCK-8实验显示融合细胞F-BMSCs、F-Mφ的增殖速度明显高于SU4-RFP(P0.05),Transwell侵袭实验显示F-BMSCs、F-Mφ的穿膜细胞数高于SU4-RFP(P0.05),融合细胞F-BMSCs、F-Mφ早期凋亡细胞比例低于SU4-RFP,(P0.05)。结论:胶质瘤干细胞与BMSCs或Mφ自发融合后,细胞克隆形成率、增殖及侵袭能力明显增强,而凋亡下降,提示胶质瘤干细胞与间质细胞融合后,恶性表型进一步增高。因此,通过阻断胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞融合,有可能成为胶质瘤治疗的潜在靶点,值得进一步深入研究。
【关键词】：胶质瘤干细胞 细胞融合 双色荧光示踪 共培养 胶质瘤干细胞 融合细胞 生物学特性
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 序言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分：胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞的体外融合及鉴定13-25
• 引言13
• 材料和方法13-17
• 实验结果17-21
• 讨论21-23
• 参考文献23-25
• 第二部分：胶质瘤干细胞与骨髓源性间质细胞融合后生物学特性初步分析25-33
• 引言25
• 材料和方法25-27
• 结果与分析27-29
• 讨论29-30
• 参考文献30-33
• 研究小结33-34
• 综述34-42
• 参考文献38-42
• 中英文对照缩略词表42-43
• 攻读硕士学位期间公开参与发表的论文43-44
• 致谢44-45

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本文编号：826985