LncRNA-MALAT1与Hsa-miR-1互作机制对大肠癌放射敏感性的影响研究

发布时间：2017-09-11 05:40

  本文关键词：LncRNA-MALAT1与Hsa-miR-1互作机制对大肠癌放射敏感性的影响研究

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【摘要】：目的1.筛选鉴定大肠癌放射敏感性相关Lnc RNA及其靶向作用micro RNA。2.初步阐明Lnc RNA-MALAT1与hsa-mi R-1对大肠癌细胞放射敏感性的影响机制。3.探讨Lnc RNA-MALAT1与hsa-mi R-1相互作用机制。方法1.通过对7株大肠癌细胞进行克隆形成实验,挑选出放射抵抗与放射敏感细胞株,采用二代测序法筛选放射诱导过程中差异表达的Lnc RNA。对差异表达的Lnc RNA进行生物信息学分析。2.使用实时定量PCR技术分别检测大肠癌细胞和大肠癌组织标本中Lnc RNA-MALAT1及hsa-mi R-1的表达量。3.利用转染技术分别下调和上调大肠癌细胞中Lnc RNA-MALAT1和hsa-mi R-1表达并联合照射处理后,通过MTT、生长克隆、划痕、凋亡及Western Blot实验分别检测细胞活力、增殖能力、迁移能力、细胞凋亡率以及MMP-2、MMP-9、E钙粘蛋白、Bax和Bcl-2蛋白表达。4.通过生物信息学分析,找出Lnc RNA-MALAT1上hsa-mi R-1结合位点,构建包含此位点的荧光素酶报告基因,通过检测荧光素酶报告基因的活力来验证两者的靶向结合能力,分别调控细胞中Lnc RNA-MALAT1和hsa-mi R-1表达量,进一步验证两者之间的相互调控作用。结果1.通过克隆形成实验,我们在7株大肠癌细胞中筛选出放射敏感性差异最大的两株细胞株,即放射抵抗的CCL244细胞和放射敏感的HCT116细胞。2.二代测序结果显示,照射前后两株细胞间均差异表达的lnc RNA有24条(2倍差异以上),通过生物信息学分析发现,其中Lnc RNA-MALAT1有极强的micro RNA结合能力,hsa-mi R-1为其靶向micro RNA。3.随着照射剂量增加,照射后时间延长,CCL244细胞中Lnc RNA-MALAT1表达量升高,hsa-mi R-1表达量减少,并呈照射剂量依赖性和时间依赖性。4.与癌旁正常大肠组织相比,大肠癌组织中Lnc RNA-MALAT1表达量升高(P0.05),hsa-mi R-1表达量降低(P0.001)。5.Lnc RNA-MALAT1下调联合照射处理组及hsa-mi R-1上调联合照射处理组与单纯照射处理组相比细胞活力、细胞增殖及迁移能力均明显受到抑制,MMP-2、MMP-9及Bcl-2表达均降低,E钙粘蛋白、Bax表达及细胞凋亡率均升高。6.荧光素酶报告基因实验表明,Lnc RNA-MALAT1 3’端序列中包含有hsa-mi R-1的结合位点;实时定量PCR实验则证实hsa-mi R-1可以调控Lnc RNA-MALAT1的表达。结论Lnc RNA-MALAT1可调控大肠癌细胞放射敏感性;hsa-mi R-1可通过与Lnc RNA-MALAT1 3’端特定区域结合,抑制Lnc RNA-MALAT1表达,从而发挥对大肠癌细胞的放射增敏作用。
【关键词】：LncRNA-MALAT1 大肠癌 hsa-mi R-1 放射敏感性 非编码RNA
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料与方法13-27
• 第三章 实验结果27-45
• 第四章 讨论45-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 综述53-63
• 参考文献58-63
• 缩略词表63-64
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论文64-65
• 致谢65-66

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本文编号：828977