二硫化钼介导的Plk1基因沉默对肝癌细胞的影响
发布时间：2017-09-11 10:52
本文关键词：二硫化钼介导的Plk1基因沉默对肝癌细胞的影响
【摘要】：目的探讨聚乙二醇修饰的二硫化钼作为基因载体的可行性及介导Plk1基因对肝癌细胞的影响。方法1)采用化学剥离法合成了二硫化钼(Mo S2)纳米片,再用高分子聚合物聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)、聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)层层修饰为Mo S2-PEG-PEI,并对合成的二硫化钼材料进行表征研究。2)通过体外细胞毒性试验对二硫化钼纳米材料进行体外毒性实验。3)用凝胶阻滞电泳实验检验二硫化钼纳米材料和小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)的结合能力。4)以Mo S2-PEG-PEI材料作为si Plk1的载体,对人肝癌细胞株(Hep G2细胞)进行转染,通过共聚焦显微镜观察细胞摄取Mo S2-PEG-PEI/si RNA复合物情况。5)通过Western blotting以及RT-q PCR实验研究Mo S2-PEG-PEI介导的si Plk1转染对肝癌细胞蛋白及m RNA表达水平的影响,并通过流式细胞技术观察肝癌细胞的凋亡情况。结果1)单层二硫化钼纳米片进行了LA-PEG修饰和加聚PEI支链后,所得到的Mo S2-PEG-PEI,具有较好的稳定性,并带有正电荷;Mo S2、Mo S2-PEG的Zeta电位分别为-17.9 and-8.9 m V。Mo S2-PEG聚合带正电荷的PEI涂层后Zeta电位增加为19.9 m V,带有更多正电荷2)Mo S2,Mo S2-PEG和Mo S2-PEG-PEI均无明显细胞毒性。3)当N/P比在5以上时,凝胶电泳结果显示Mo S2-PEG-PEI明显阻滞si RNA。4)共聚焦显微镜显示Mo S2-PEG-PEI/si RNA成功转染Hep G2细胞。5)Western blotting以及RT-q PCR实验结果均表明,Mo S2-PEG-PEI/si RNA沉默Hep G2细胞相关蛋白表达。6)流式细胞技术检测显示,将Mo S2-PEG-PEI作为si Plk1载体转染肝癌Hep G2细胞,可使肝癌细胞凋亡。结论二硫化钼纳米片通过表面修饰后所得到的Mo S2-PEG-PEI无明显的细胞毒性,具有良好的生物相容性,可以作为si Plk1的载体转染肝癌细胞,有较高的转染效率,并可下调肝癌细胞Plk1蛋白的表达,导致肝癌细胞的凋亡。因此,Mo S2-PEG-PEI可以作为一种纳米载体,用于肝癌肿瘤的基因治疗。
【关键词】：二硫化钼 非病毒载体 肝癌 基因治疗
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：
- 中文摘要4-6
- Abstract6-9
- 前言9-11
- 第一部分 用于基因治疗的二硫化钼材料的制备及性质初步探究11-19
- 1 材料和方法11-13
- 2 结果13-16
- 3 讨论16-18
- 4 小结18-19
- 第二部分 聚乙二醇修饰的二硫化钼介导siPlk1 对肝癌细胞转染及基因治疗研究19-27
- 1 材料和方法19-21
- 2 结果21-25
- 3 讨论25-26
- 4 小结26-27
- 结论27-28
- 参考文献28-31
- 综述 过渡金属二硫化物在肿瘤基因治疗中的研究进展31-44
- 参考文献38-44
- 中英文缩略词表44-45
- 攻读学位期间公开发表的论文45-46
- 致谢46-48
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本文编号：830265
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