瘦素促进肿瘤相关巨噬细胞分泌IL-18并影响乳腺癌细胞侵袭转移的研究

发布时间：2017-09-12 07:04

  本文关键词：瘦素促进肿瘤相关巨噬细胞分泌IL-18并影响乳腺癌细胞侵袭转移的研究

  更多相关文章： 乳腺癌 肿瘤微环境 肿瘤相关巨噬细胞 IL-18 侵袭转移

【摘要】：目的：本课题主要研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在瘦素(leptin)作用下,对乳腺癌进展的影响,以及对相关作用机制进行探讨,为乳腺癌研究和治疗提供实验依据。方法：1.首先用佛波酯(PMA)刺激人单核细胞THP1使其贴壁,然后加入白细胞介素4(IL-4)共同作用,诱导单核细胞分化为TAMs。2.瘦素作用于TAMs之后,收集条件培养基以处理乳腺癌细胞,通过侵袭实验和划痕实验检测乳腺癌细胞的侵袭迁移变化。3.分别采用qRT-PCR、Western Blotting和ELISA,检测leptin对TAMs、乳腺癌细胞中IL-18表达和分泌的影响,并分析相关信号通路。4.免疫组织化学(IHC)检测病人乳腺疾病样本中TAMs和IL-18的表达；建立裸鼠乳腺癌移植模型,瘤内注射巨噬细胞去除剂氯弗松(CCL),研究移植瘤生长和肝肺转移的变化,并用IHC检测leptin处理组裸鼠瘤体内IL-18表达的变化。结果：1.PMA. IL-4作用后,THP1被诱导分化为贴壁的M2型巨噬细胞。2.采用leptin处理TAMs后的条件培养基作用于乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3和MDA-MB-231。实验结果证明：leptin可通过促进TAMs表达分泌IL-18,从而促进肿瘤细胞的侵袭转移。3. leptin促进TAMs表达分泌IL-18,主要是通过激活细胞信号通路NF-κB,从而上调IL-18转录因子NF-κB1而实现的(P0.01)；而leptin刺激乳腺癌细胞MCF-7表达分泌IL-18的机制,主要为通过激活细胞信号通路PBK/Akt,从而上调IL-18转录因子ATF-2 (P＜0.01)。4.临床病人样本分析结果显示,CD163(M2型巨噬细胞标记分子)和IL-18的表达与乳腺癌的恶性程度关系密切(P0.05)；裸鼠移植瘤实验表明,去除巨噬细胞的作用后,Leptin处理组的IL-18表达显著降低(P0.05)；且巨噬细胞的耗竭可以减慢裸鼠乳腺癌的生长,减少肺转移。结论：1.leptin可促进TAMs、乳腺癌细胞表达分泌IL-18,进而促进了肿瘤细胞的侵袭转移。2. Leptin促进TAMs表达分泌IL-18与激活NF-κB信号通路之后,上调IL-18转录因子NF-κB1相关；在乳腺癌细胞MCF-7中主要是激活信号通路PBK/Akt,并作用于转录因子ATF-2引起。此结果证明,在乳腺癌肿瘤微环境中,leptin可同时促进肿瘤相关巨噬细胞和乳腺癌细胞IL-18的表达,但这两种细胞是通过激活不同的信号通路,上调不同IL-18转录因子引起的。3. Leptin、CD163和IL-18的水平与乳腺癌的恶性程度密切相关。裸鼠移植瘤试验中,应用CCL.去除巨噬细胞的作用后,瘤体IL-18表达水平降低,肿瘤生长减慢和肺转移减少。
【关键词】：乳腺癌 肿瘤微环境 肿瘤相关巨噬细胞 IL-18 侵袭转移
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分：Leptin作用的肿瘤相关巨噬细胞对乳腺癌细胞侵袭和转移的影响13-23
• 1 材料与方法13-18
• 2 结果18-21
• 3 讨论21-23
• 第二部分：Leptin促进肿瘤相关巨噬细胞分泌促炎因子IL-18的机制研究23-33
• 1 材料与方法23-28
• 2 结果28-31
• 3 讨论31-33
• 第三部分：Leptin诱导TAMs表达分泌IL-18对裸鼠乳腺癌的影响33-41
• 1 材料与方法33-36
• 2 结果36-40
• 3 讨论40-41
• 全文总结41-42
• 参考文献42-46
• 文献综述46-52
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士期间发表的学术论文53

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本文编号：835756