EZH2下调对T细胞淋巴瘤的增殖及化疗敏感性的影响

发布时间：2017-09-13 11:35

  本文关键词：EZH2下调对T细胞淋巴瘤的增殖及化疗敏感性的影响

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【摘要】：目的:T细胞淋巴瘤(TCL)是来源于T细胞的恶性克隆增殖性疾病,占所有淋巴瘤的12%~15%。其病理类型繁杂,是一种侵袭性较强,生物学行为及临床表现具有明显异质性的一类恶性淋巴肿瘤。该病另一重要特点是其发病率具有明显的种族及地区差异性,在HTLV-1流行的亚洲国家发病率更高。而大多数TCL对传统的经典治疗方案疗效较差。临床上亟需寻找到新的治疗方法。EZH2蛋白是重要的组蛋白甲基转移酶分子,依靠其高度保守的SET结构域可以甲基化H3K27,三甲基化的H3K27可以将PRC1复合物招募到特定的基因位点,沉默与细胞分化、抑制增殖在内的基因,导致肿瘤的发生。前期免疫组化显示TCL组织中EZH2高表达。所以本实验旨在通过慢病毒介导的EZH2-sh RNA及EZH2抑制剂UNC1999处理hut78细胞系,观察EZH2对细胞增殖、凋亡的影响;及与化疗联合后的协同增敏作用。为EZH2抑制剂应用到临床治疗中提供理论基础。同时,从凋亡、耐药及粘附转移三方面探讨EZH2的相关调控机制。方法:1.利用慢病毒介导的EZH2-sh RNA转染人T细胞淋巴瘤hut78构建EZH2下调的单克隆细胞系,在RT-q PCR和Western-blot进行验证的基础上,采用MTS、Brdu、流式检测靶基因EZH2下调后对Hut78细胞增殖凋亡的影响。2.采用多种临床常用化疗药物(阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、顺铂、氟达拉滨、地塞米松)梯度处理hut78、hut78 control及hut78 EZH2-sh RNA,利用MTS检测化疗药物对三种细胞系细胞增殖的影响。3.采用EZH2小分子抑制剂UNC1999梯度处理hut78,MTS检测其对hut78细胞增殖抑制情况。同时联合化疗药物梯度处理hut78,观察化疗增敏情况。4.采用RT-q PCR或Western-blot方法,从细胞凋亡及细胞耐药、转移角度检测EZH2下调后相关分子表达情况变化。结果:1.采用EZH2-sh RNA下调hut78细胞EZH2的表达水平后,MTS检测显示:hut78出现明显的增殖抑制,抑制率达46.8%。2.采用不同化疗药物分别处理hut78、hut78 EZH2-sh RNA细胞,后者抑制率明显增加,药物的IC50值下降,二者具有统计学差异(P0.05)。3.采用EZH2抑制剂梯度处理hut78细胞,hut78出现明显的增殖抑制性,呈显著的时间及浓度依赖性。4.采用EZH2抑制剂联合化疗药物处理hut78,明显增加了化疗药物的增殖抑制性,Q值分析显示EZH2抑制剂对化疗药物具有协同增敏作用(q1.15)。5.检测hut78、hut78 EZH2-sh RNA及EZH2抑制剂处理后的hut78三种细胞系中主要凋亡分子(P53、Bcl-2)、耐药分子(LRP、MDR-1、MRP-1)及细胞转移粘附分子(VCAM、ICAM)的表达情况,RQ值(相对表达量)具有差异性,(P0.05)。结论:1.采用EZH2-sh RNA转染hut78及利用EZH2抑制剂处理hut78细胞系后,可引起hut78中EZH2的表达下降。2.EZH2的下调可明显抑制肿瘤细胞的增殖。3.EZH2的下调可增加hut78对化疗药物的敏感性,EZH2抑制剂与化疗药物之间具有协同作用。4.EZH2下调可引起细胞凋亡、耐药及转移粘附分子的表达异常,提示EZH2具有广泛的调控作用,对肿瘤的发生、耐药及转移中发挥作用。
【关键词】：EZH2 shRNA UNC1999 T细胞淋巴瘤 增殖 化疗增敏
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 1 对象和方法14-31
• 1.1 材料、试剂与仪器14-17
• 1.1.1 细胞系14
• 1.1.2 主要实验试剂14-15
• 1.1.3 主要实验药物15
• 1.1.4 实验仪器15-16
• 1.1.5 主要试剂配制16-17
• 1.2 实验方法17-31
• 1.2.1 细胞培养17-18
• 1.2.2 细胞计数18-19
• 1.2.3 慢病毒介导EZH2 - shRNA感染皮肤T细胞淋巴瘤H u t 78 细胞株19-22
• 1.2.4 RT-PCR22-24
• 1.2.5 蛋白提取测定24-25
• 1.2.6 蛋白电泳25-27
• 1.2.7 MTS检测细胞增殖率27
• 1.2.8 MTS法测定药物对Hut-78细胞生长的抑制率27-28
• 1.2.9 Brdu试验28-29
• 1.2.10 细胞凋亡29
• 1.2.11 细胞周期29
• 1.2.12 采用RT-PCR检测下游耐药蛋白的表达情况29-30
• 1.2.13 采用RT-PCR检测细胞粘附分子的表达情况30
• 1.2.14 统计学分析30-31
• 2 结果31-49
• 2.1 EZH2基因沉默后对hut78细胞系的影响31-32
• 2.1.1 RT-PCR及Western验证31-32
• 2.1.2 增殖抑制32
• 2.2 EZH2基因沉默后增加化疗药物敏感32-35
• 2.3 EZH2抑制剂对hut78细胞系的影响35-42
• 2.4 慢病毒转染沉默EZH2与EZH2抑制剂联合应用42-44
• 2.5 EZH2对细胞凋亡、耐药及转移相关分子的调控44-49
• 3 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述 EZH2基因与肿瘤关系的研究进展57-72
• 综述参考文献66-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 胡峗宏;林晓燕;崔嵘嵘;王铮元;许诚;;EZH2蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义[J];现代医院;2013年07期

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本文编号：843475