中草药猫眼草提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

发布时间：2017-09-13 16:24

  本文关键词：中草药猫眼草提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

  更多相关文章： 猫眼草 胃癌 SGC-7901 MTT法 流式细胞术 免疫组化

【摘要】：目的观察猫眼草提取物在体外诱导人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用;探讨猫眼草诱导人胃癌SGC-7901细胞细胞凋亡的能力,并分析其可能发生的作用机制。方法采用体外培养技术,以不同浓度猫眼草(0.2 g/L,0.4 g/L,0.8 g/L,1.6g/L,3.2 g/L)作用于人胃癌SGC-7901细胞,用MTT比色法检测不同浓度的猫眼草对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;荧光显微镜下观察SGC-7901细胞凋亡形态变化;应用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的细胞凋亡率及凋亡周期变化;通过免疫组化法检测胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果1、MTT法测定不同浓度猫眼草的对胃癌细胞SGC-7901作用24h、48h、72h均有明显的抑制作用,与对照组相比有显著的差异性(P0.05),且随着作用时间的延长,其产生的抑制作用越明显,表现出时间及剂量依赖性。2、相差显微镜下观察不同浓度的猫眼草处理的SGC-7901细胞后与对照组相比,实验组细胞形态发生了明显的变化,生长缓慢,其贴壁状态差,细胞边缘不整、出现皱缩、变圆,形态变差,失去了正常细胞形态。3、荧光显微镜下观察不同浓度的猫眼草处理的SGC-7901细胞后,与对照组相比实验组细胞较对照组细胞生长缓慢较稀疏,细胞体积变圆、变小,细胞核出现固缩,细胞质浓缩;折光性变强,呈现不规则形状,呈致密强荧光,DNA浓缩并向核膜靠拢,有少量凋亡小体形成4、流式细胞仪细胞周期分析显示,细胞经猫眼草处理后,在G1和S期细胞数比率减少,而在G2/M期细胞数比率增加,猫眼草可能通过阻断胃癌SGC-7901细胞在G2/M期,诱导SGC-7901细胞凋亡,且细胞周期阻滞效应和凋亡率均呈剂量依赖性。5、细胞免疫组化结果表明,SGC-7901细胞胞浆内有Bcl-2表达,棕黄色颗粒较多,强阳性细胞较多,棕黄色颗粒增多,大部分表达较强,随着猫眼草浓度的加大,SGC-7901细胞表达Bcl-2蛋白随着时间、剂量的增加而阳性表达率明显降低,着色变淡,强阳性染色的比例减少,棕黄色不表达或较弱表达。结论1.MTT结果显示,在一定范围内猫眼草可明显抑制胃癌SGC-7901细胞的生长增殖,与对照组相比均有显著的差异性(P0.05),并随着剂量的增加和时间的延长,凋亡率越发明显。2.通过倒置相差显微镜和荧光显微镜的观察,镜下见细胞形态发生明显变化,可清楚的看到凋亡小体,证实了猫眼草提取物可诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡。3.流式细胞术表明不同浓度的猫眼草可以改变细胞周期,实验表明细胞周期G2/M期抑制比率增加明显,表明猫眼草可阻滞SGC-7901细胞在G2/M期并诱导其凋亡。4.免疫组化显示不同药物浓度猫眼草作用于人胃癌SGC-7901细胞,结果表明SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白的表达下调,细胞凋亡可能与猫眼草下调Bcl-2的表达有关,Bcl-2作为抑制细胞凋亡的基因之一,下调Bcl-2基因可能是诱导凋亡的重要作用机制。
【关键词】：猫眼草 胃癌 SGC-7901 MTT法 流式细胞术 免疫组化
【学位授予单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中英文对照缩略词表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-14
• 材料与方法14-22
• 结果22-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述37-43
• 参考文献41-43
• 致谢43-44
• 硕士期间发表论文44

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本文编号：844759