生物钟基因NPAS2对肠癌细胞株DLD-1生物学行为影响的基础与临床研究

发布时间：2017-09-14 21:04

  本文关键词：生物钟基因NPAS2对肠癌细胞株DLD-1生物学行为影响的基础与临床研究

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【摘要】：目的本研究试图阐述人体生物钟基因家族的NPAS2基因在结肠癌细胞株DLD-1中的作用以及在肠癌中相关临床病理因素分析研究,讨论生物钟基因与肠癌发生发展的关系。通过体外实验,在肠癌细胞株中分析研究NPAS2的表达异常对肠癌细胞的生长增殖、细胞周期、细胞凋亡及侵袭迁移的影响。为治疗肠癌基因及周期性治疗提供依据。方法采用定量PCR方法检测108例肠癌患者的癌灶及癌旁组织中NPAS2表达量,分析其高/低表达与肿瘤临床病理因素的相关性。使用RNA干扰技术,敲除肠癌细胞株DLD-1中NPAS2基因表达,建立瞬时转染NPAS2-siRNA的DLD-1细胞株,用qRT-PCR法对NPAS2基因敲除进行鉴定。NPAS2基因沉默表达后:用CCK-8及免疫组化方法检测细胞生长、增殖的变化;用流式细胞术检测细胞周期变化情况;用TUNEL方法检测细胞凋亡的变化;使用细胞划痕技术观察细胞迁移能力变化,用Transwell方法检测细胞侵袭情况。结果108例肠癌患者中,肿瘤癌灶组织NPAS2的mRNA表达量比相应的癌旁组织减低(p0.05);临床病理因素分析表明NPAS2的表达缺失与肿瘤的大小、TNM分期及远处转移相关(p0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤分化、淋巴结转移及腹膜转移无关(p0.05)。在肠癌细胞株DLD-1中,分别瞬时转染干扰RNA:SiRNA-1#、SiRNA-2#,对照RNA:SiRNA-Con,成功获得实验组NPAS2低表达DLD-1/SiRNA-1#组、DLD-1/SiRNA-2#组及对照组DLD-1/SiRNA-Con,实验组的NPAS2表达量分别被显著下调(p0.05)。NPAS2表达沉默后,实验组细胞生长速度明显比对照组增快(p0.05),同时实验组细胞相对于对照组细胞多处于G2/M分裂期(p0.05),但是NPAS2的表达缺失对两组的细胞凋亡无明显影响(p0.05)。细胞划痕实验证实NPAS2表达沉默后,实验组细胞迁移能力较对照组增强(p0.05);Transwell实验同时表明实验组细胞侵袭能力较对照组增强(p0.05)。结论108例组织标本中,生物钟基因NPAS2在肠癌患者肿瘤组织中表达下调,其表达下调与肿瘤的大小、TNM分期及肿瘤远处转移相关。细胞实验表明NPAS2的表达缺失可使肠癌细胞处于S期及G2/M分裂期,减少G0/G1停滞,促进细胞生长。同时,NPAS2的表达沉默增强肠癌细胞的迁移及侵袭能力。但生物钟基因NPAS2的紊乱表达与肿瘤细胞的凋亡之间未见明显相关。通过临床及基础相关研究,我们证实生物钟基因NPAS2可能作为抑癌因子,参与了肠癌的发生发展。其可能作为肠癌的新的肿瘤治疗靶点及评估肠癌预后的标志物。
【关键词】：生物钟基因 NPAS2 结直肠癌
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料与方法11-18
• 结果18-27
• 讨论27-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述生物钟基因 NPAS2 与实体肿瘤的研究进展36-45
• 参考文献41-45
• 缩略词表45-46
• 攻读学位期间公开发表的论著、论文46-48
• 致谢48-49

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本文编号：852299