MicroRNA-320d通过调控靶基因CDK6抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖

发布时间：2017-09-14 22:39

  本文关键词：MicroRNA-320d通过调控靶基因CDK6抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖

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【摘要】：目的:本文主要探讨Hsa-mi R-320d(人微小非编码RNA-320d)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖的影响及分子机制。方法:1.构建mi R-320d过表达和抑制的慢病毒载体,转染DLBCL细胞株OCI-LY1,CCK-8法检测细胞增殖率。2.利用生物信息学软件Target Scan、mi Randa、mi RDB筛选预测可能与mi R-320d特异性结合的靶基因并合成其特异干扰序列。3.提取OCI-LY1细胞、mi R-320d过表达细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR技术检测CDK6基因m RNA表达水平;提取OCI-LY1细胞、mi R-320d过表达及对照组细胞总蛋白,用Western blotting技术检测CDK6蛋白表达水平。4.DLBCL细胞中,分别转染3'UTR-NC+mi RNA-NC,3'UTR-NC+mi RNA-320d mimic;CDK6 3'UTR+mi RNA-NC,CDK6 3'UTR+mi RNA-320d mimic;CDK63'UTR-MU+mi RNA-NC、CDK6 3'UTR-MU+mi RNA-320d mimic。用双荧光素酶报告基因测定试剂法检测酶活性,判断mi R-320d是否与CDK6的3’UTR特异性结合。5.构建CDK6干扰的慢病毒载体,转染DLBCL细胞株OCI-LY1,CCK-8法观察细胞增殖率,Annexin V/FITC法检测其对细胞凋亡的影响。结果:1.成功筛选并预测出hsa-mi R-320d可能与CDK6 3’UTR特异性结合,并成功构建mi R-320d过表达和抑制以及CDK6干扰的慢病毒载体。2.与对照组相比,mi R-320d过表达组DLBCL细胞增殖能力减弱(P0.05);CDK6抑制组与对照组相比,DLBCL细胞增殖能力减弱(P0.05)。与对照组相比,尚未发现mi R-320d过表达组与CDK6干扰组对DLBCL细胞凋亡率有影响(P0.05)。3.mi R-320d过表达组中CDK6 m RNA相对表达值为0.21±0.04,对照组中CDK6m RNA相对表达值为1.0±0.22,说明转染mi R-320d后,可以抑制DLBCL细胞中CDK6 m RNA的表达,而转染通用载体后,DLBCL细胞中CDK6 m RNA的表达无显著变化。mi R-320d过表达组中CDK6蛋白表达的相对灰度值低于对照组中的相对灰度值。表明mi R-320d可以抑制DLBCL细胞中CDK6蛋白的表达。4.实验组的相对荧光素酶活性值为0.37±0.01,对照组值为1±0.06。说明mi R-320d与CDK6 3’UTR特异性结合。结论:mi R-320d过表达可以抑制DLBCL细胞增殖能力,其作用机制与mi R-320d抑制CDK6表达进而影响细胞增殖有关,本研究为弥漫大B细胞淋巴瘤基因治疗提供新的思路和方法。
【关键词】：弥漫大B细胞淋巴瘤 microRNA-320d CDK6 增殖
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-15
• 1 材料与方法15-31
• 1.1 实验材料15-17
• 1.2 实验方法17-31
• 2 实验结果31-38
• 2.1 miR-320d过表达慢病毒载体转染OCI-LY1 细胞转染效率31
• 2.2 CDK6-shRNA转染OCI-LY1 细胞转染效率31-32
• 2.3 转染mi R-320d过表达慢病毒载体或CDK6-shRNA慢病毒载体后对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖能力的影响32-33
• 2.4 转染mi R-320d后对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞OCI-LY1 凋亡能力的影响33-34
• 2.5 转染CDK6-shRNA后对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞OCI-LY1 细胞凋亡能力的影响34-35
• 2.6 转染mi R-320d过表达慢病毒载体后CDK6 在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中的表达35-36
• 2.7 构建双荧光素酶报告基因验证mi R-320d与CDK63’UTR区特异性结合36-38
• 3 讨论38-41
• 4 结论41-42
• 参考文献42-48
• 综述48-60
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果61-62
• 个人简历62

【参考文献】

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1 蒋会勇;李慧灵;胡海;何滢;赵彤;;弥漫性大B细胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl-2基因扩增的检测[J];中华病理学杂志;2007年02期

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本文编号：852788