双氢青蒿素与阿霉素联用对人结肠癌肿瘤细胞耐药性的初步研究

发布时间：2017-09-15 19:31

  本文关键词：双氢青蒿素与阿霉素联用对人结肠癌肿瘤细胞耐药性的初步研究

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【摘要】：目的：肿瘤多药耐药现象对肿瘤的治疗及预后有着重大影响。以HCT8/ADR人结肠癌耐药细胞为研究对象,观察双氢青蒿素与阿霉素对该细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡的影响,并对两药合用的协同作用机制进行了初步的研究,从而为中药联合化疗提供新的思路,同时为耐药肿瘤临床治疗提供实验依据及理论依据。方法：体外培养HCT8/ADR人结肠癌细胞,48h后收集细胞并调整好细胞数。其中①以5×103的密度铺种于96孔板。设空白对照组,实验组为阿霉素(DOX)组、双氢青蒿素(DHA)组、阿霉素和双氢青蒿素联用组,共计4组,并设置药物浓度如下阿霉素组(mg·L-1)为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；双氢青蒿素组(mg·L-1)为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；阿霉素和双氢青蒿素联用组：分别固定双氢青蒿素浓度为5 mg·L-1和10 mg·L-1,阿霉素(mg·L-1)浓度依次为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5。在孵育24h后,用MTT法分别检测双氢青蒿素、阿霉素及两药联合对HCT8/ADR细胞的增殖影响并评估两药联合的作用效果；②以5×104的密度铺种于12孔板。设空白对照组,实验组为阿霉素(DOX)组、双氢青蒿素(DHA)组、阿霉素和双氢青蒿素联用组,共计4组,根据从①中得到的结果,调整药物浓度,选取阿霉素组浓度分别为0.05、0.1 mg/L；双氢青蒿素组10 mg/L。用流式细胞仪分析各组药物浓度对细胞周期及凋亡率的影响；并采用Western blot检测自噬。结果：1.与单用药相比,双氢青蒿素和阿霉素的联用分别在10 mg/L和0.1 mg/L时就能够使HCT8/ADR人结肠癌细胞的生存率降到50%以下。2.流式细胞术检测显示,双氢青蒿素和阿霉素联用可以诱导HCT8/TADR结肠癌细胞发生明显凋亡,与单用药组相比具有统计意义(P0.05)。3.Western blot检测显示,双氢青蒿素和阿霉素联用能够上调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和下调周期蛋白CyclinD1来诱导HCT8/ADR人结肠癌细胞发生自噬。结论：双氢青蒿素和阿霉素联用可以抑制HCT8/ADR的增殖,能够促使凋亡发生。通过上调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ促使自噬体形成,通过自噬机制降解周期蛋白CyclinDl从而导致表达下降。表明双氢青蒿素能逆转耐药,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感。
【关键词】：双氢青蒿素 阿霉素 耐药 结肠癌 联合用药
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文献研究12-22
• 1.1 肿瘤的形成12
• 1.2 中医学对肿瘤的认识12-13
• 1.3 青蒿素及其衍生物13-14
• 1.4 双氢青蒿素的药理活性14-17
• 1.5 双氢青蒿素抗肿瘤机制17-18
• 1.5.1 抑制肿瘤细胞增殖17
• 1.5.2 促进肿瘤细胞凋亡17
• 1.5.3 抑制肿瘤血管形成17-18
• 1.5.4 抑制肿瘤侵袭和转移18
• 1.6 阿霉素抗肿瘤18
• 1.7 多药耐药发生机制18-19
• 1.8 对抗肿瘤耐药策略—多药联合19-22
• 第二章 双氢青蒿素联合阿霉素对HCT 8/T人结肠癌细胞增殖抑制和协同作用22-32
• 2.1 材料与仪器22-23
• 2.1.1 主要仪器22
• 2.1.2 材料22
• 2.1.3 细胞22-23
• 2.1.4 试剂配制23
• 2.2 实验方法23-24
• 2.2.1 细胞复苏23
• 2.2.2 细胞传代23-24
• 2.2.3 MTT法原理24
• 2.2.4 肿瘤细胞生长抑制实验操作24
• 2.2.5 HCT8/ADR人结肠癌细胞生长抑制实验24
• 2.3 结果24-29
• 2.3.1 吉非替尼与伏立诺他对HCT8/ADR耐药肿瘤细胞生长抑制实验24-25
• 2.3.2 吉非替尼与伏立诺他分别与阿霉素联用对HCT8/ADR人结肠癌细胞生长抑制实验25-26
• 2.3.3 双氢青蒿素与阿霉素联合对HCT8/ADR人结肠癌细胞生长抑制试验26-29
• 2.4 讨论29-31
• 2.5 小结31-32
• 第三章 双氢青蒿素联合阿霉素对HCT 8/ADR人结肠癌细胞周期及凋亡影响32-38
• 3.1 材料与仪器32-33
• 3.1.1 主要仪器32
• 3.1.2 材料32
• 3.1.3 细胞32
• 3.1.4 试剂配制32-33
• 3.2 实验方法33-34
• 3.2.1 细胞复苏33
• 3.2.2 细胞传代33-34
• 3.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡原理34
• 3.2.4 凋亡测试方法34
• 3.3 结果34-37
• 3.4 讨论37
• 3.5 小结37-38
• 第四章 WESTERN BLOT检测自噬蛋白和周期蛋白38-44
• 4.1. 材料与仪器38-39
• 4.1.1 主要仪器38
• 4.1.2 材料38
• 4.1.3 细胞38-39
• 4.1.4 试剂配制39
• 4.2 实验方法39-41
• 4.2.1 BCA法测定蛋白浓度39-40
• 4.2.2 蛋白收集40
• 4.2.3 制胶40
• 4.2.4 电泳40-41
• 4.2.5 转模41
• 4.3 结果41-42
• 4.4 讨论42-43
• 4.5 小结43-44
• 结语44-46
• 参考文献46-51
• 作者简介51-52
• 在校期间参与发表论文情况52-53
• 致谢53-54
• 统计学审核证明54

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