1-甲基乙内酰脲及顺铂对SGC-7901细胞增殖侵袭迁移的研究

发布时间：2017-09-15 20:51

  本文关键词：1-甲基乙内酰脲及顺铂对SGC-7901细胞增殖侵袭迁移的研究

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【摘要】：目的:探讨1-甲基乙内酰脲及顺铂对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制,为临床应用提供实验依据。方法:1、MTT法:检测药物对SGC-7901细胞增殖的抑制效果,分别设四个组:即对照组(等体积PBS溶液)、1-甲基乙内酰脲(M组)、顺铂(DDP)、1-甲基乙内酰脲(M)与顺铂(DDP)联合组。通过予以1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药及不同浓度的处理,检测24h、48h、72h后药物对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用。2、细胞划痕实验:检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞迁移能力的影响;3、Transwell侵袭实验:检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。4、RT-PCR实验:检测1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合用药对SGC-7901细胞中MMP9、CD44V6 m RNA表达影响。5、Western-blotting检测:1-甲基乙内酰脲、顺铂、和两者联合用药对SGC-7901细胞MMP9、CD44V6蛋白质表达的影响。结果:1.MTT分析法检测结果显示:①1-甲基乙内酰脲和顺铂在0.5-80 umol/L的浓度范围内均能抑制SGC-7901细胞的增殖,其抑制率呈时间、浓度依赖关系,随着浓度或作用时间的增加抑制率增加。②1-甲基乙内酰脲单独作用时,与对照组相比,各处理组均能抑制SGC-7901细胞增殖,有统计学差异(P0.05)。③顺铂单独作用时,与对照组相比,各处理组均显著性抑制SGC-7901细胞增殖,有统计学差异(P0.05)。④1-甲基乙内酰脲与顺铂联合作用,同等浓度下对SGC-7901细胞增殖的抑制作用明显优于二者单独作用,具有显著性差异(p0.01)。2.划痕实验24h后观察结果表明:1-甲基乙内酰脲及顺铂处理的SGC-7901细胞,对照组修复的要比实验组多,宽度变小,实验组的伤痕宽度变化小。在48h后,对照组的划痕变窄,几乎处于愈合,而实验组的划痕变化比对照组小,且两者联合作用时效果更佳。各实验组与对照组差异具有显著性。实验结果显示:用药后肿瘤细胞的运动能力减弱,结果提示:1-甲基乙内酰脲和顺铂能抑制细胞迁移,3.Transwell侵袭实验结果表明:与对照组相比,使用1-甲基乙内酰脲、顺铂和两药联合均能抑制SGC-7901细胞的侵袭,且两药联合对抑制SGC-7901细胞的侵袭效果最佳。4.RT-PCR实验:结果显示,MMP9、CD44V6m RNA在SGC-7901细胞中均有表达。用1-甲基乙内酰脲、顺铂及两者联合处理后,SGC-7901细胞中MMP9、CD44V6 m RNA表达降低。5.Western-blotting实验结果显示:与对照组相比,1-甲基乙内酰脲、顺铂、两者联合用药处理细胞后,MMP9、CD44V6蛋白表达下调,且1-甲基乙内酰脲、顺铂两者联合用药效果最佳,MMP9、CD44V6蛋白表达下调最明显。结论:1.1-甲基乙内酰脲、顺铂均可抑制人SGC7901细胞的生长增殖。联合应用抑制作用增强,呈现协同作用;2、1-甲基乙内酰脲、顺铂可抑制人SGC7901细胞的侵袭与迁移,联合用药抑制作用增强,MMP-9蛋白和CD44V6蛋白表达降低。
【关键词】：1-甲基乙内酰脲 胃癌 增殖 侵袭 转移
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料和仪器16-20
• 2.1 实验细胞16
• 2.2 实验仪器、设备16-17
• 2.3 实验试剂17-18
• 2.4 试剂的配制18-20
• 第3章 实验方法20-26
• 3.1 细胞复苏及培养20
• 3.2 MTT法20-21
• 3.3 细胞划痕实验21
• 3.4 细胞侵袭实验21-22
• 3.5 PT-PCR22-24
• 3.6 WesternBlot24-25
• 3.7 统计学处理25-26
• 第4章 结果26-38
• 4.1 MTT比色法检测26-30
• 4.2 划痕实验检测 1-甲基乙内酰脲及顺铂对人SGC-7901细胞迁移的影响30-31
• 4.3 Transwell侵袭实验检测 1-甲基乙内酰脲及顺铂对SGC-7901细胞侵袭的影响31-32
• 4.4 RT-PCR实验结果32-35
• 4.5 WesternBlot. 实验检测SGC-7901细胞MMP-9\CD44V6蛋白表达的影响35-38
• 第5章 讨论38-42
• 第6章 结论42-44
• 综述44-48
• 参考文献48-54
• 在读期间发表的论文54-56
• 致谢56

【参考文献】

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1 杨静;景在平;;血管内皮生长因子在胃癌中作用的研究进展[J];中国医药导报;2011年33期

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本文编号：858843