PI3Kγ抑制剂AS605240对小鼠胰腺癌的治疗作用及机制研究

发布时间：2017-09-18 02:01

  本文关键词：PI3Kγ抑制剂AS605240对小鼠胰腺癌的治疗作用及机制研究

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【摘要】：背景和目的:近年来胰腺癌的发病率逐年增高,作为一种对放化疗均不敏感且预后极差的肿瘤,人们迫切需要比起传统疗法更加有效的治疗手段。胰腺癌在基因水平来看有许多较为明显的特征,其中之一是K-Ras基因突变,75%-90%的胰腺癌发生和进展期间都可检测到,而Ras家族的关键下游靶标是磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K),PI3K可激活蛋白激酶Akt,从而激活胰腺癌侵袭性。最近的研究发现新型噻唑烷二酮类化合物AS605240是一种高选择性的PI3Kγ抑制剂。AS605240可以强烈抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成,同时也能有效诱发多种神经母细胞肿瘤细胞的凋亡及抑制小鼠神经母细胞移植瘤的生长,此外还在胰腺炎、溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎、肺纤维化等小鼠模型中显示出良好的抗炎效果且对小鼠没有明显毒性。由于血管生成、逃避凋亡、慢性炎症刺激均为肿瘤发病的重要步骤,以及p110γ在胰腺癌细胞株与胰腺癌组织中的高表达,我们设想AS605240可能是一种对胰腺癌有良好疗效而又没有明显毒副作用的药物。目前,AS605240对胰腺癌的防治研究国内外尚未见相关报道。因此,我们使用胰腺癌细胞株评估AS605240对体外胰腺癌细胞的直接抗肿瘤作用,同时也使用昆明小鼠构建胰腺癌皮下移植瘤模型,首次研究AS605240在体内模型中对胰腺癌的治疗作用,研究其与化疗药物联合使用可能的增敏作用,并探讨可能的分子机制,为将AS605240开发成良好的胰腺癌化学预防及治疗药物打下坚实的基础。方法:首先进行体外试验,使用MTT法检测AS605240对胰腺癌细胞株生长的效果。之后进行动物试验,胰腺癌荷瘤小鼠模型建立后随机分为4组:空白对照组、as605240治疗组、单纯5-fu治疗组、as605240与5-fu联合治疗组。给药开始后每隔2日测量一次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。于第29日处死小鼠,剥离出肿瘤组织并称量重量,计算体积,同时取小鼠内脏器官。he染色观察小鼠器官及肿瘤病理组织学变化,免疫组化检测ki-67、cyclind1、β-catenin表达水平变化,采用原位末端标记tunel、caspase-3免疫荧光来检测肿瘤组织凋亡情况,采用免疫荧光检测cd31观察肿瘤组织血管生成情况。采用免疫荧光检测cd11b观察肿瘤组织内骨髓来源抑制性细胞变化情况,采用免疫荧光检测f4/80以观察肿瘤组织内的肿瘤相关巨噬细胞变化情况,用免疫荧光双染分别检测肿瘤微环境中m1、m2两种类型肿瘤相关巨噬细胞数量变化,再采用免疫荧光双染分别检测抑肿瘤细胞因子(ifn-γ)和促肿瘤细胞因子(il-10、mmp-9)的变化。采用逆转录pcr检测肿瘤组织inos、ifn-γ、mr、il-10、vegf、mmp-9的表达情况。结果:1.各组肿瘤体积、小鼠生存时间比较小鼠移植瘤体积随实验进行逐渐增长,as605240治疗组肿瘤体积较对照组相对较小,生存时间也较对照组有所延长。2.小鼠器官he染色检测器官病理学变化肝肾肺脾he染色结果显示各组小鼠器官的细胞均排列有序,组织无异常坏死区,结构与正常器官一致。3.mtt检测体外肿瘤细胞生长情况as605240对体外培养的胰腺癌细胞生长状态没有明显影响。4.免疫组化检测肿瘤增殖及细胞周期蛋白指标表达水平变化as605240治疗对肿瘤组织中ki-67、cyclind1、Β-catenin蛋白的表达水平没有明显影响。5.免疫荧光检测tunel、caspase-3观察肿瘤组织凋亡as605240对小鼠胰腺癌组织中tunel阳性细胞及caspase-3阳性细胞数量没有明显影响。6.免疫荧光检测肿瘤组织内免疫细胞数量变化as605240治疗能显著减少移植瘤内浸润的cd11b阳性骨髓来源免疫抑制细胞的数量,减少了肿瘤组织内f4/80阳性巨噬细胞数量,同时还减少了m2型肿瘤相关巨噬细胞的数量而不影响m1型肿瘤相关巨噬细胞数量,使得m1/m2比值升高。表明as605240抗胰腺癌作用与改变肿瘤微环境内的免疫细胞成分比例有关。7.免疫荧光检测肿瘤相关细胞因子表达情况as605240治疗组鼠胰腺癌移植瘤组织中抑肿瘤细胞因子ifn-γ阳性细胞变化不大,而促肿瘤细胞因子il-10、mmp-9、vegf阳性细胞显著减少。8.逆转录pcr检测移植瘤组织细胞因子的表达情况as605240治疗组鼠胰腺癌移植瘤组织中促肿瘤细胞因子il-10、mmp-9、vegf相对mrna减少,而抑肿瘤细胞因子ifnγ相对mrna表达没有明显变化。9.免疫荧光检测肿瘤组织血管生成情况as605240治疗能显著减少鼠胰腺癌移植瘤中cd31阳性细胞数量。结论:1.AS605240能够一定程度上抑制小鼠肿瘤生长并延长小鼠生存时间。2.实验观察及HE染色显示AS605240对小鼠没有明显毒副作用。3.AS605240对体外肿瘤细胞的生长没有明显作用。4.AS605240对肿瘤组织增殖及细胞周期标记物Ki-67、Cyclin D1、β-catenin蛋白的表达没有明显影响。5.AS605240能够轻度刺激肿瘤组织凋亡,但未达到统计学显著。6.AS605240能够明显降低肿瘤内浸润的抑制性免疫细胞和M2型肿瘤相关巨噬细胞的数量。7.AS605240能够使得促肿瘤细胞因子IL-10、MMP-9、VEGF相对mRNA表达减少,而不影响抑肿瘤途径细胞因子IFNγ相对mRNA表达。8.AS605240能够明显抑制肿瘤血管生成。9.本实验为胰腺癌治疗提供了一种新的思路。
【关键词】：胰腺癌 PI3Kγ抑制剂 肿瘤微环境 AS605240
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 致谢3-4
• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 材料与方法17-31
• 结果31-48
• 讨论48-57
• 结论57-59
• 参考文献59-67
• 综述：GVAX肿瘤疫苗研究进展67-77
• 参考文献74-77
• 附录77-78
• 个人简历78-79

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本文编号：872692