醛酮还原酶家族1的C1亚型在胆管癌发生发展中作用及机制

发布时间：2017-09-19 19:32

  本文关键词：醛酮还原酶家族1的C1亚型在胆管癌发生发展中作用及机制

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【摘要】：研究目的近年来,关于肿瘤代谢相关蛋白的研究越来越多,通过研究发现,这些代谢酶与肿瘤的发生、发展、复发及转移相关,且许多代谢蛋白已用作肿瘤诊断的标记物及治疗的靶点。消化系肿瘤胆管癌是指源于主要肝管和肝外胆管的癌,约占肿瘤发生率的3%。目前,胆管癌的研究已成为热门,虽然有很多学说来解释说明其发病机制,但都并不全面和清楚,所以,继续深入研究胆管癌的发生机制,有可能为胆管癌的发生、发展、复发及转移提供新思路,为非手术治疗提供新的突破口。醛酮还原酶(Aldo-keto reductases AKRs)是参与氧化还原反应的三大酶类超家族之一,广泛地分布于原核生物和真核生物。AKRs以烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(triphosphopyridine nucleotide NADPH)为辅酶,参与氧化还原反应。本文旨在研究AKR1C1(Aldo-keto reductase family 1 member C1)在胆管癌中的表达,并初步探讨其在胆管癌发生、发展及转移中的作用。研究方法采用消化系肿瘤组织芯片和免疫组化分析方法,检测不同肿瘤患者癌组织及癌旁正常组织AKR1C1的表达;实时荧光定量PCR检测各肿瘤细胞株AKR1C1的表达,蛋白免疫印迹western blot检测各肿瘤细胞株及10例胆管癌病人肿瘤组织、癌旁正常组织AKR1C1的表达;在胆管癌细胞株QBC939中感染沉默AKR1C1的病毒质粒及空质粒,CCK-8(Cell Counting Kit-8)比色法检测各实验组细胞增殖。划痕实验和transwell检测各实验组细胞的迁移情况;流式细胞术技术检测各实验组QBC939细胞的周期阻滞和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot方法分别检测各实验组QBC939细胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的m RNA和蛋白表达情况。结果:肿瘤组织芯片和免疫组化结果显示,与正常组织相比,胆管癌组织中AKR1C1呈高表达;western blot验证10例胆管癌患者肿瘤组织及癌旁正常组织AKR1C1表达,确定在AKR1C1在肿瘤组织中呈高表达;实时荧光定量PCR和western blot检测发现胆管癌细胞株QBC939高表达AKR1C1;CCK-8比色法检测感染沉默AKR1C1的病毒质粒组与空质粒对照组细胞增,沉默组细胞的增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(p0.05);流式细胞术技术检测结果显示,感染沉默AKR1C1的病毒质粒组出现细胞周期阻滞,凋亡增加;同时,RT-PCR和Western-blot方法分别检测各实验组QBC939细胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的m RNA和蛋白表达发现,survivin、caspase-3和E-cadherin变化有统计学意义。证明了AKR1C1与胆管癌的发生、发展及转移有关,但具体通路仍然不能解释清楚,需要后续实验继续研究验证。结论:AKR1C1在胆管肿瘤组织与肝外胆管癌细胞株QBC939中高表达,其与胆管癌细胞的发生、发展及转移均相关,可能是其参与或间接参与了癌细胞的生长周期、凋亡及转移相关途径,为胆管癌的相关研究提供了新的思路和方向。
【关键词】：AKR1C1 QBC939细胞 增殖 细胞周期 凋亡
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.8
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-11
• 前 言11-14
• 第一部分 AKR1C1在消化系统各肿瘤的表达及胆管癌组织、细胞验证14-33
• 一、材料与方法14-26
• 二、实验结果26-31
• 三、讨 论31-33
• 第二部分 沉默胆管癌细胞株QBC939中AKR1C1基因，检测细胞的增殖、凋亡及迁移33-44
• 一、材料与方法33-39
• 二、实验结果39-43
• 三、讨 论43-44
• 第三部分 在胆管癌细胞株QBC939中沉默基因AKR1C1后，细胞的增殖、凋亡及迁移的相关基因表达研究44-49
• 一、材料与方法45-46
• 二、实验结果46-47
• 三、讨 论47-49
• 参考文献49-54
• 综述54-60
• 参考文献57-60
• 致谢60

【参考文献】

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1 ;Influence of survivin and caspase-3 on cell apoptosis and prognosis in gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年13期

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本文编号：883515