临床放疗方式对肺腺癌A549细胞及正常人淋巴细胞的旁效应及再传递效应

发布时间：2017-09-20 01:12

  本文关键词：临床放疗方式对肺腺癌A549细胞及正常人淋巴细胞的旁效应及再传递效应

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【摘要】：背景:辐射旁效应是指未受辐射的细胞表现出与受辐射的细胞相同或相似的生物学反应的现象,这些生物学反应主要基因突变、基因不稳定性增加、DNA单双键断裂、染色体断裂、细胞增殖及凋亡、炎症反应、致瘤性转化及癌症形成等。放射治疗中,除受照区域的放射损伤症状外,常会出现乏力、酸痛、食欲下降、消化不良、白细胞计数下降等全身症状,其中旁效应可能起重要作用。远距离器官损伤,程度和组织类型有关,非照射细胞能减轻照射细胞的损伤。在临床局部照射,整体的放射生物学行为会更复杂,需要跳出直接照射损伤的传统观念,进一步认识正常组织损伤的机制。目的:1、研究经6MV-X线照射的A549细胞培养液即条件培养液培养未受照射的A549细胞后引发的细胞旁效应;2、研究经6MV-X线照射的A549细胞培养液即一代条件培养液培养正常人淋巴细胞引发的细胞旁效应,以及处理过产生细胞旁效应的新鲜培养液即二代条件培养液培养正常淋巴细胞后产生的旁效应。旨在能够以新的思路解释局部照射后白细胞减少,有助于进一步认清辐射旁效应的生物学意义。方法:1、将肺癌A549细胞培养至对数生长期时分别接受0Gy、0.5Gy、1Gy、1.5Gy、2 Gy五种剂量的6MV-X线进行辐照,照射3h后将受照细胞的培养液作为条件培养液,培养未受照射的A549细胞,使用成克隆法检测细胞的存活分数;将A549细胞分为四组培养,分别设为对照组、照射组、条件培养液组、新鲜培养液。选取24h、48h、72h、96h四个时间节点使用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测2Gy的6MV-X线照射后A549细胞的凋亡水平;选取24h、48h、72h、96h四个节点使用PI单染流式细胞术检测各组A549细胞的细胞周期变化。2、将健康人淋巴细胞分为对照组、一代条件培养液组、二代条件培养液组、一代干预组、二代干预组,对照组使用新鲜培养液,A549细胞受照后培养24h后的培养液培养正常淋巴细胞作为一代条件培养液组,一代条件培养液处理淋巴细胞24h后将淋巴细胞取出,更换新鲜培养液,培养24h后的培养液再处理正常淋巴细胞作为二代条件培养液组,一代二代条件培养液组均加入地塞米松作为干预组,所有实验组细胞均于各培养液中培养24h后检测各组淋巴细胞存活分数及凋亡情况。统计学处理:本文所有数据以均数±标准差(mean±S D)的形式来表示,检验方法使用独立样本t检验,所有数据均使用SPSS16.0统计软件进行分析,p0.05有统计学意义。结果:1、细胞存活曲线:0.5 Gy以后的区域细胞的存活分数随辐射剂量的增加而降低。条件培养液组的细胞凋亡率与对照组相比明显升高,而且随着时间的增加而增高,在72h达到最大(p0.05)。条件培养液组细胞中G2/M期细胞明显较对照组增加(p0.05),并且随着时间增加而增高,但是72h后,G2/M期细胞降低,且与对照组无明显差异,G2/M期阻滞解除。2、一代条件培养液与二代条件培养淋巴细胞后细胞存活率较对照组下降(p0.05),凋亡率明显升高(p0.05);地塞米松干预后淋巴细胞较相应未干组存活率升高(p0.05),凋亡率明显下降(p0.05)。结论:1、6MV-X线照射可通过条件培养液介导A549细胞的电离辐射旁效应,且在72h时达到最大;2、临床照射旁效应可通过条件培养基介导正常淋巴细胞的损伤,且可通过二代条件培养液对健康淋巴细胞产生链式损伤,从而产生远程传递效应。
【关键词】：放射损伤 辐射旁效应 淋巴细胞损伤
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 绪论14-21
• 1.1 研究背景14-19
• 1.1.1 辐射物理学的基本概念14
• 1.1.2 辐射生物学的基本概念14-15
• 1.1.3 辐射损伤的产生15-16
• 1.1.4 辐射诱导的旁效应16-17
• 1.1.5 旁效应的机制17-18
• 1.1.6 临床放射治疗远距离损伤与旁效应18-19
• 1.2 本研究的目的、内容与技术路线19-21
• 1.2.1 研究目的19
• 1.2.2 研究内容19-20
• 1.2.3 技术路线20-21
• 第二章 6MV-X线照射对肺癌A549细胞的旁效应21-33
• 2.1 材料与方法21-26
• 2.1.1 主要材料21
• 2.1.2 主要实验试剂21
• 2.1.3 主要实验仪器设备21-22
• 2.1.4 主要试剂配制22-23
• 2.1.5 主要实验方法及步骤23-25
• 2.1.6 统计学分析25-26
• 2.2 结果与分析26-31
• 2.2.1 A549细胞正常培养26
• 2.2.2 克隆形成实验结果26-28
• 2.2.3 细胞存活情况的测定28-29
• 2.2.4 G2/M期细胞周期的测定29
• 2.2.5 细胞凋亡检测结果29-31
• 2.3 讨论31-33
• 第三章 正常淋巴细胞旁效应及旁效应再传递33-40
• 3.1 材料和方法33-36
• 3.1.1 主要材料33
• 3.1.2 主要实验试剂33
• 3.1.3 主要实验仪器设备33-34
• 3.1.4 主要试剂配制34
• 3.1.5 主要实验方法及步骤34-36
• 3.1.6 统计学方法36
• 3.2 结果与分析36-38
• 3.2.1 淋巴细胞存活情况36-37
• 3.2.2 淋巴细胞凋亡结果37-38
• 3.3 讨论38-40
• 第四章 主要结论和展望40-41
• 4.1 主要结论40
• 4.2 工作展望40-41
• 参考文献41-46
• 综述46-56
• 参考文献52-56
• 攻读硕士期间发表的论文和参加的课题56-57
• 致谢57

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本文编号：885014