CD151对人结肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究

发布时间：2017-09-20 14:09

  本文关键词：CD151对人结肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长作用及机制的研究

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【摘要】：目的:本研究拟用筛选后的人结肠癌干细胞,建立裸鼠移植瘤模型。在细胞水平和整体动物水平上,探讨在人结肠癌干细胞裸鼠成瘤模型中CD151基因对Wnt信号转导通路的作用影响。方法:1运用细胞培养技术对HT29细胞系及被敲除CD151的HT29细胞系在含有血清的培养基中进行贴壁培养,对CD133+CD44+结肠癌干细胞和敲除CD151的CD133+CD44+结肠癌干细胞在无血清培养基中进行悬浮培养,观察细胞的生长状况,获取足量对数生长期的结肠癌干细胞及普通结肠癌细胞,并通过含有血清的培养基对结肠癌干细胞进行诱导分化来鉴定结肠癌干细胞。2运用激光共聚焦显微镜检测HT29细胞组和敲除CD151的HT29细胞组中CD44蛋白和CD133蛋白的荧光表达情况。3裸鼠皮下移植瘤模型的构建:将HT29细胞和敲除CD151的HT29细胞及其分选后的两种CD133+CD44+的结肠癌干细胞分别接种于裸鼠皮下,观察其成瘤情况及进行病理学检查。4采用实时荧光定量RT-PCR技术检测两组CD133+CD44+的结肠癌干细的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表达。结果:1 HT29细胞和敲除CD151的HT29细胞在含有血清的培养基中贴壁生长状况良好,CD133+CD44+结肠癌干细胞和敲除CD151的CD133+CD44+结肠癌干细胞在无血清培养基中呈球状悬浮生长,生长状况良好。肿瘤干细胞球通过含有血清的培养基培养,在其诱导分化后均贴壁生长。2激光共聚焦显微镜检测到HT29细胞组CD44蛋白、CD133蛋白的荧光强度明显高于敲除CD151的HT29细胞组。3 CD133+CD44+结肠癌干细胞组的裸鼠成瘤率、瘤体体积、恶性程度均高于HT29细胞组和敲除CD151的CD133+CD44+结肠癌干细胞组。4应用实时荧光定量的RT-PCR技术检测到CD133+CD44+结肠癌干细胞所形成的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表达量明显高于敲除CD151的CD133+CD44+结肠癌干细胞组。结论:1经CD133抗体和CD44抗体标记筛选的结肠癌干细胞有较强的增殖和侵袭能力;CD151基因缺失的HT29细胞中结肠癌干细胞特征性标记物CD44蛋白和CD133蛋白的表达较原株HT29细胞明显减少。2结肠癌干细胞组敲除CD151基因后可使与调节细胞增殖和分化功能密切相关的Wnt-5a和β-catenin基因转录水平明显降低,其裸鼠成瘤率、瘤体体积、组织的恶性程度及对周围组织的侵袭能力也随之降低,提示CD151可能通过Wnt通路影响结肠癌的增殖和侵袭功能。3进一步阐明CD151基因的生理功能及监测其基因的表达水平,可能为今后结肠癌的治疗提供有力依据。
【关键词】：结肠癌干细胞 CD151 CD133 CD44 Wnt-5a β-catenin
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRAST6-8
• 英文缩写8-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-19
• 1 实验材料10-12
• 2 实验方法12-19
• 结果19-21
• 附图21-29
• 附表29-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-38
• 综述 肿瘤干细胞的研究进展38-50
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

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本文编号：888502